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《維甲酸聯(lián)合膽汁酸對結(jié)腸癌細胞增殖、抑制凋亡的影響及初步機制研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、維甲酸聯(lián)合膽汁酸對結(jié)腸癌細胞增殖、抑制凋亡的影響及初步機制研究[摘要]目的探討維甲酸聯(lián)合膽汁酸對結(jié)腸癌細胞增殖、抑制凋亡的影響及初步機制。方法選用不同濃度的維甲酸及脫氧膽酸鈉，分別或聯(lián)合作用于人結(jié)腸腺癌HT-29細胞，檢測細胞的增殖以及抑制凋亡情況。結(jié)果維甲酸聯(lián)合膽汁酸可以有效抑制HT-29細胞的生長，誘導細胞凋亡，效果優(yōu)于單獨應用（P<0.05）。結(jié)論維甲酸聯(lián)合膽汁酸能夠抑制結(jié)腸癌細胞增殖，且抑制凋亡的程度與濃度相關(guān)，能夠為結(jié)腸癌的治療提供參考。中國6/vie [關(guān)鍵詞]維甲酸；膽汁酸；結(jié)腸癌；細胞增殖；抑
2、制凋亡 [中圖分類號]R735.35[文獻標識碼]A[]1673-9701（2017）01-0008-03 結(jié)腸癌是消化道常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率在我國僅次于胃癌和食道癌，居消化道惡性腫瘤的第3位。隨著我國居民生活質(zhì)量以及飲食結(jié)構(gòu)的變化，結(jié)腸癌的臨床發(fā)病率越來越高。腸腔內(nèi)部微環(huán)境的變化同結(jié)腸癌發(fā)病之間的聯(lián)系受到人們的重視，并且研究人員發(fā)現(xiàn)該病的發(fā)生發(fā)展同動物脂肪的攝入存在聯(lián)系，推測原因是高脂飲食會加大腸腔內(nèi)部的脫氧膽酸，脫氧膽酸作為膽汁酸的一種，能夠通過誘發(fā)細胞DNA的損傷而誘導結(jié)腸癌出現(xiàn)[1]。維甲酸（A
3、TRA）有著廣泛抗腫瘤增殖的活性，能夠降低結(jié)腸癌細胞的耐藥性，不過大劑量使用的毒副作用較為明顯，這就需要探索聯(lián)合用藥抑制細胞增殖的小劑量ATRA。本研究分析ATRA聯(lián)合膽汁酸脫氧膽酸對結(jié)腸癌細胞增殖以及凋亡的影響，探討其可能的作用機制，現(xiàn)報道如下?！ ?資料與方法 1.1一般資料 結(jié)腸癌細胞株為STT為Promaga公司生產(chǎn)，小牛血清為杭州四季清公司生產(chǎn)，脫氧膽酸為上海華美公司生產(chǎn)，兔抗人COX-2抗體為Neomarkers公司生產(chǎn)，ATRA為sigma公司生產(chǎn)，酶標儀型號為Elx800。 1.2方法
4、1.2.1細胞培養(yǎng)以及藥物準備腫瘤細胞在培養(yǎng)時選用胎牛血清培養(yǎng)液，條件設(shè)置方面，溫度37℃，CO25%，濕度100%，培養(yǎng)細胞1d到對數(shù)生長期，在弱光條件下?lián)Q液后進行實驗[2]。使用100mg的ATRA加入乙醇當中配成10mmol/L的母液，在-20℃條件下避光儲存。實驗所需要的ATRA使用培養(yǎng)液進行稀釋，且全部實驗均需要重復3次進行細胞培養(yǎng)。HT-29細胞培養(yǎng)使用RPMI-1640溶液，添加胎牛血清、鏈霉素以及青霉素，37℃條件下傳代培養(yǎng)，每天觀察細胞的生長狀況[3]?！ ?.2.2MTT實驗取對數(shù)生長期HT
5、-29細胞接種到96孔板，每孔10000。細胞貼壁1d之后按組別添加濃度10、50、100μmol/L的ATRA，每孔20μL，每組共5個復孔，持續(xù)培養(yǎng)24h、48h或72h，在反應終止前吸去培養(yǎng)液，并加入RPMI-1640培養(yǎng)基，孵箱內(nèi)3h之后棄上清，使用異丙醇100μL溶解結(jié)晶振蕩10min之后應用酶標儀讀取值[4]?！ ?.2.3細胞周期以及細胞凋亡HT-29細胞根據(jù)5×105/mL接種到6空板，每孔3mL，1d之后按組別加入不同濃度的脫氧膽酸，每孔3mL，每組設(shè)置5個復孔。作用1d之后收集貼壁以及懸浮的
6、細胞，根據(jù)說明書使用細胞儀進行檢測[5]。 1.2.4免疫細胞染色HT-29細胞根據(jù)5×105/mL接種到6空板，每孔3mL，在1d之后分別加入不同濃度的脫氧膽酸，每組設(shè)置3個復孔。作用1d之后終止反應并吸去培養(yǎng)液。使用冷丙酮進行10min固定，PBS反復進行3次沖洗，滴加100μL的兔抗人COX-2抗體，5℃冰箱儲存，第2天使用PBS反復進行3次沖洗，滴加100μL羊抗兔IgG-HRP，并37℃孵育1h，PBS反復進行3次沖洗之后DAB顯色，脫水，透明，使用樹膠封片[6]?！ ?.3判斷標準 結(jié)果判定方面
7、，COX-2及caspase-3染色定位到細胞質(zhì)。PARP-1染色定位到細胞核，其中陽性物質(zhì)為棕黃色或黃色的顆粒。每張玻片選取3個視野（×400），每個視野統(tǒng)計100個細胞，由病理科醫(yī)師使用相關(guān)軟件來測定三者的密度值之后取均值[7]?！ ?.4統(tǒng)計學方法 檢測數(shù)據(jù)用SPSS18.0軟件進行分析，計量資料用（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義?！ ?結(jié)果 2.1不同濃度/時間ATRA對結(jié)腸癌細胞增殖的抑制率 不同濃度/時間的ATRA對于細胞增殖有明顯的抑制作用，8μmol/
8、L的ATRA在作用72h之后對腫瘤細胞的抑制效果顯著優(yōu)于24h以及48h（P<0.05），見表1?！ ?.2ATRA聯(lián)合脫氧膽酸對HT-29細胞周期和細胞凋亡的影響 流式細胞儀的分析結(jié)果表明，10μmol/L的脫氧膽酸聯(lián)合8μmol/L的ATRA作用HT-29細胞24h，能夠增加HT-29細胞的凋亡，同時細胞周期阻滯在G0/G1期，并且S期細胞明顯減少（P<0.05），見表2。 2
