資源描述：
《熒光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素b2地含量》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案年級：2013級班級：化學(xué)三班姓名：徐碧云學(xué)號：41307137熒光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的含量【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)熒光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的分析原理。（1）掌握熒光光度計(jì)的操作技術(shù)和測定多維葡萄糖中維生素B2的方法。【實(shí)驗(yàn)原理】維生素B2，又叫核黃素，是橘黃色無臭的針狀結(jié)晶，其結(jié)構(gòu)式為維生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有機(jī)溶劑，在中性或酸性溶液中穩(wěn)定，光照易分解，對熱穩(wěn)定。維生素B2水溶液在430-440nm藍(lán)光或紫外光照射下會發(fā)生綠色熒光，熒光峰在535nm，在PH=6~7的溶液中熒光強(qiáng)度最大，在PH=11的堿性溶
2、液中熒光消失。故可以用熒光光譜法測定維生素B的含量。多維葡萄糖中含有維生素B，B，C，D及葡萄糖，其中維生素C和葡萄糖在水溶液中不發(fā)熒光，維生素B本身無熒光，在堿性溶液中鐵氰化鉀氧化成硫色素后方產(chǎn)生熒光，維生素D用二氯乙酸處理后才有熒光，且最大激發(fā)波長在390nm，最大發(fā)射波長在480nm，他們都不干擾維生素B的測定。維生素B在堿性溶液中經(jīng)光線照射，會發(fā)生分解而轉(zhuǎn)化為光黃素，后者的熒光比核黃素的熒光強(qiáng)的多。因此，測量維生素B的熒光時，溶液要控制在酸性范圍內(nèi)，且須在避光條件下進(jìn)行。【儀器與試劑】930熒光光度計(jì)500ml容量瓶10只；5ml吸量管2只。
3、10ug.ml-1維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液：將粉狀維生素B2結(jié)晶置于干燥器中24h以上，準(zhǔn)確稱取10.0mg維生素B2，溶于熱蒸餾水中，轉(zhuǎn)入1L棕色容量瓶中，冷卻后加蒸餾水至標(biāo)線，搖勻，置暗處保存。冰乙酸；多維葡萄糖粉試樣?！緦?shí)驗(yàn)步驟】（1）、標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配置及其熒光強(qiáng)度的測量分別吸取10ug.ml-1維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液，0.50、1,00、1.50、2.00、2,50、3.00ml于50ml容量瓶中，各加精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案入冰乙酸2ml，加水至標(biāo)線，搖勻。在930熒光計(jì)上用1cm熒光比色皿于激發(fā)波長400nm,發(fā)射波長為540nm處，測量標(biāo)準(zhǔn)系列溶液
4、的熒光強(qiáng)度。（2）多維葡萄糖粉中維生素的B2測定準(zhǔn)確稱取0.1~0.2g多維葡萄糖粉試樣，用少量水溶解后轉(zhuǎn)入50ml容量瓶中，加冰乙酸2ml，搖勻。在于測定標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的條件下，測定其熒光強(qiáng)度。平行測定三次?！緮?shù)據(jù)處理】根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液測定的數(shù)據(jù)，以相對熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，50ml溶液中所含維生素的質(zhì)量（ug）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待測試液中維生素B2的質(zhì)量，計(jì)算多維葡萄糖粉中維生素B2的百分含量。維生素B2的平均含量0.0052%【思考題】（1）試解釋熒光光度法較吸光光度法靈敏度高的原因。熒光強(qiáng)度與激發(fā)光強(qiáng)度成正比，提高激發(fā)光強(qiáng)度可以
5、增大熒光強(qiáng)度，使測定的靈敏度提高；而吸收光度法測定的吸光度，不管是增大入射光強(qiáng)度還是提高檢測器的靈敏度，都會使透射光信號與入射光信號以同樣的比例增大，吸光度值不會改變，因此靈敏度不能提高。精彩文檔實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)文案（2）選擇濾光片的依據(jù)是什么？能否根據(jù)待測液的顏色選擇濾光片？消除單色器中的雜散光。（3）維生素B2在pH=6~7時熒光最強(qiáng)，本實(shí)驗(yàn)為何在酸性溶液中進(jìn)行?維生素B2在堿性溶液中經(jīng)光線照射，會發(fā)生分解而轉(zhuǎn)化為光黃素，后者的熒光比核黃素的熒光強(qiáng)的多。因而測定維生素B2的熒光時，溶液控制在堿性且避光條件下。精彩文檔
