注射雪膽乙素在大鼠體內(nèi)藥動學(xué)探究

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1、注射雪膽乙素在大鼠體內(nèi)藥動學(xué)探究［摘要］建立血漿樣品中雪膽乙素的測定方法，研究雪膽乙素在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)特征。大鼠經(jīng)尾靜脈注射給藥，以苯海拉明為內(nèi)標(biāo)(internalstandard,IS),采用液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜(liquidchromatographytandemmassspectrometry,LC-MS/MS)法測定不同時間點大鼠血漿中雪膽乙素濃度。質(zhì)譜采用電噴霧(ESI)離子源，多反應(yīng)監(jiān)測模式正離子檢測，確定目標(biāo)化合物及內(nèi)標(biāo)的離子對分別為m/z503.2/113.1和m/z256.0/167.2o色譜柱為Ag訂entZOB

2、AXSB-C18(2.1mmX50mm,1.8um),甲醇-0.1%甲酸55:45等度洗脫，流速為0.2mL-min-lo采用DAS2.0軟件對所得的血藥濃度進行擬合，求算相應(yīng)的藥動學(xué)參數(shù)。大鼠經(jīng)尾靜脈注射雪膽乙素3.0mg-kg-l,目標(biāo)物血漿質(zhì)量濃度在10.5?3150Ug?L-1內(nèi)線性關(guān)系良好(R2二0.996),標(biāo)準(zhǔn)曲線定量下限為10.5ug?L-1,信噪比S/N=12；日內(nèi)精密度RSD精密稱取內(nèi)標(biāo)鹽酸苯海拉明對照品1.14mg,置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，配成苯海拉明質(zhì)量濃度為100mg?L-1的內(nèi)標(biāo)儲備液。精密

3、量取內(nèi)標(biāo)儲備液，用甲醇稀釋成質(zhì)量濃度為50Ug?L-1的內(nèi)標(biāo)溶液，置于-4冰箱中備用。2.4標(biāo)準(zhǔn)溶液血漿樣品的配制精密量取雪膽乙素對照品儲備液，甲醇逐級稀釋得0.105,0.315,1.05,3.15,10.5,31.5mg-L-1系列對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。取上述對照品溶液各20uL,加入180uL空白血漿，配成雪膽乙素血漿質(zhì)量濃度分別為10.5,31.5,105,315,1050,3150ug?LT的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品。2.5質(zhì)控血漿樣品的配制按2.4項方法制備雪膽乙素低、中、高3個質(zhì)量濃度質(zhì)控血漿樣品(分別為31.5,315,2835ug?L-1

4、)o2.6血漿樣品的處理取血漿樣品50uL,依次加入甲醇100UL,內(nèi)標(biāo)溶液50UL,渦流混合1min,沉淀蛋白,于1萬r?min-1離心5min,取上清5uL進行LC-MS/MS分析。2.7藥代動力學(xué)實驗健康雄性Wistar大鼠6只，給藥前12h禁食，自由飲水。尾靜脈注射雪膽乙素3.0mg?kg-1［用生理鹽水和聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯(吐溫80)將雪膽乙素溶解配成質(zhì)量濃度為0.3g-L-1的澄清尾靜脈注射液，吐溫80質(zhì)量分?jǐn)?shù)實驗采用電噴霧(ESI)離子源，選擇多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式以正離子進行質(zhì)譜掃描,同時選擇和檢測2組特定且直接

5、相關(guān)的離子對，實現(xiàn)對前體離子和產(chǎn)物離子同時監(jiān)測。在本實驗色譜條件下，既能與生物樣品中的內(nèi)源性基質(zhì)實現(xiàn)分離，又使得待測物在較短的時間內(nèi)出峰。在色譜分離過程中還發(fā)現(xiàn)，若在流動相中加入適量的甲酸靈敏度顯著提高，于是選擇在流動相中加入0.1%的甲酸以提高靈敏度。本文采用LC-MS/MS建立了定量分析血漿中雪膽乙素的方法，首次考察了雪膽乙素在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)研究。尾靜脈注射雪膽乙素的藥動學(xué)參數(shù)AUCO-t為(811.615±111.578)ug?h?L-l,tl/2為(1.285±1.390)h,CL為(3.627±0.487)L?h?kg-1,V

6、d為(6.721±7.429)L-kg-lo該法操作簡便、快捷，具有分析時間短(5.1min)、靈敏度高(10.5Pg?L-1)的優(yōu)點，已成功應(yīng)用于雪膽乙素注射液在大鼠體內(nèi)藥動學(xué)研究，為其在臨床研究和新藥設(shè)計提供理論基礎(chǔ)和依據(jù)。[參考文獻][1]董建勇，岳磊，邵薇薇，等.中華雪膽化學(xué)成分研究(III)[J].中國中藥雜志，2012,37(6)：814.[2]聶瑞麟.葫蘆科植物三菇皂就研究十年進展(1980-1992)[J].云南植物研究，1994,16(2)：201.[3]白敏，李宏亮，徐貴麗.雪膽屬植物化學(xué)成分及藥理活性研究進展[J].

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