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《tdi在大鼠體內(nèi)的代謝與其劑量效應(yīng)關(guān)系的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、l主要試劑和儀器2，4-TDI(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9596)；2，4一甲苯二胺(2，41DA)，sigma公司；甲苯，色譜純；七氟丁酸酐，98％；氫氧化鈉溶液，4509／L；鹽酸溶液；1mol／L；硫酸，3aol／L：緩沖溶液：稱取27．29磷酸二氫鉀，用200ral水溶解．用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7．0；堿性飽和苦味酸溶液；谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、Y一谷氨?；D(zhuǎn)移酶杖m、肌酐(cr)、總膽紅素(，IBIL)、尿素氮㈣)檢測(cè)試劑盒(南京建成生物制品公司)。HOPE掘D8050A型動(dòng)式染毒柜(天津合普公司)；沖擊式采樣器；島津Gc一2
2、010氣相色譜儀，配置EcD檢測(cè)器，RESTEKRtx一50，30m×0．25mm×0．25Pm毛細(xì)管色譜柱；梅特勒XP一206分析天平；漩渦混勻器：恒溫水箱：離心機(jī)。2方法2．1染毒模型的建立TDI蒸氣的發(fā)生與檢測(cè)：TDI通過(guò)霧化器混合空氣逸入HOPE地D8050A型動(dòng)式染毒柜中，后經(jīng)管道收集、排放。染毒柜內(nèi)保持一定的負(fù)壓，避免毒物外泄。氣相色譜法(GBZl60．67-2004)測(cè)定空氣中TDI濃度，每lh采樣1次，每次2個(gè)平行樣，采樣時(shí)間為15min，，通過(guò)適當(dāng)校正混合氣流量以及純凈氣流量以達(dá)到所需的染毒濃度。選用成年SD大鼠48只，雌雄各半，體重180"--2
3、209，按體重隨機(jī)分成4組，每組12只，采用以上TDI蒸汽發(fā)生裝置對(duì)大鼠進(jìn)行呼吸道染毒，據(jù)相關(guān)研究2，4一TDI經(jīng)呼吸道染毒，大鼠的半數(shù)致死濃度LC∞為98mg／m3，隨機(jī)為4組：49．88_+3．96mg／m3(1／2LC∞)、12．44±1．30mg／m3(1／8LC50)、3．26±0．63mg／m3(1／32LC∞)以及空白對(duì)照組(正常飼養(yǎng))，連續(xù)染毒5d，每天4h，染毒期間禁止攝食及飲水。每天染毒后放入代謝籠飼養(yǎng)，期間正常飼養(yǎng)，用代謝瓶收集此后20小時(shí)的尿液，然后轉(zhuǎn)移至25mL的聚乙烯塑料瓶中，標(biāo)注清楚后，一部分立即送往實(shí)驗(yàn)室測(cè)定肌酐，另一部分-20℃冷藏
4、保存，待測(cè)。末次染毒后，禁食禁水，于次日處死大鼠，眼眶取血，2000r／min離心lO分鐘，分取上層血清，置于全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定判定ALT(U／L)、&ST(U幾)、GGT(U／L)、ALP(u／L)、TBIL(umol／L)、BuN(mol／L)、Cr(11mol／L)等肝腎功能相關(guān)生化酶水平。2．2鼠尿中1DA的測(cè)定方法．2．2．1氣相色譜條件儀器條件：根據(jù)TDA的氣相色譜的出峰情況確定進(jìn)樣口、柱溫、檢測(cè)器溫度分別為290℃、160℃、320"C，柱流量為1．OOml／min，分流比為20：1，在此條件下能夠?qū)DA峰和七氟丁酸酐衍生物及尿樣中的雜峰分離開(kāi)
5、，見(jiàn)表l。表1氣相色譜條件項(xiàng)目條件色譜儀島津GC一2010檢測(cè)器電子捕獲檢測(cè)器(ECD)色譜柱RESTEKRtx-50，30mXO．25mm×O．25Pm毛細(xì)管色譜柱汽化室溫度℃290．柱溫℃160檢測(cè)器溫度℃320柱流量ml／ain1．00分流比20：1載氣N22．2．2鼠尿酸化后水浴時(shí)間的選擇：同一份含有TDA的尿樣，分成6組，每組6份，1份未酸化，其余5份分別水浴酸化處理Oh、2h、4h、8h及16h，對(duì)不同組的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，選擇最優(yōu)的酸化時(shí)間。2．2．3鼠尿中TDA的測(cè)定吸取2．Oml尿樣于lOml離心管中，加1．5ml硫酸溶液，搖勻，蓋好，放置于
6、沸水浴加熱8小時(shí)，取出冷卻至室溫，加5ml氫氧化鈉溶液混勻，加2ml甲苯，振搖2min，于1500r／min離心10分鐘。取出約1．5ml甲苯層，放入另一離心管中，加20uL七氟丁酸酐，振搖2min，放置10rain，加iml緩沖液，振搖2min，以除去過(guò)剩的七氟丁酸酐，放置2min，將甲苯層轉(zhuǎn)移入另一離心管中，在表1色譜條件下氣相色譜法測(cè)定，保留時(shí)間定性，峰面積定量。2．3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS18．0進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，多組間比較TDA含量，采用方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析(OneWayANOVA)。進(jìn)一步進(jìn)行組間兩兩比較時(shí)，若方差齊時(shí)，采用SNK檢驗(yàn)(Stud
7、ent-Newman-Keuls法)；若方差不齊時(shí)，采用Games-Howell檢驗(yàn)。二結(jié)果l染毒柜中TDI蒸汽濃度的檢測(cè)結(jié)果通過(guò)控制動(dòng)式染毒柜中混合氣流量和純凈氣流量，進(jìn)而來(lái)調(diào)節(jié)染毒柜中TDI蒸汽的濃度，采用氣相色譜法(GBZl60．67-2004)測(cè)定染毒柜中TDI濃度，每lh采樣1次，每次2個(gè)平行樣，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2，對(duì)不同染毒天數(shù)的對(duì)應(yīng)的各劑量組進(jìn)行組內(nèi)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果p>O．05，說(shuō)明不同染毒天數(shù)的各劑量組組內(nèi)濃度無(wú)顯著差異，這進(jìn)一步表明明各劑量組染毒濃度比較穩(wěn)定，染毒柜中TI)I蒸汽的濃度調(diào)節(jié)控制較好，達(dá)到了實(shí)驗(yàn)要求。表2染毒柜中TDI蒸汽濃度的檢測(cè)結(jié)
