瘦肉精在大鼠體內(nèi)的代謝ppt課件.ppt

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1、克侖特羅在大鼠體內(nèi)的代謝目錄1瘦肉精簡介2摘要3實驗材料和方法4結(jié)果分析與討論瘦肉精簡介理化性質(zhì)：通常我們所說的瘦肉精是指克倫特羅(Clenbuterol)，學名為鹽酸克侖特羅，簡稱克侖特羅，又名克喘素、氨哮素、氨必妥、氨雙氯喘通。為白色結(jié)晶狀粉末，味略苦。結(jié)構(gòu)簡式：分子式：C12H18Cl2N2O理化特性：白色或類白色的結(jié)晶粉末，無臭、味苦，熔點161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。當鹽酸克林特羅以超過治療劑量5-10倍的用量用于家畜飼養(yǎng)時，即有顯著的營養(yǎng)“再分配效應(yīng)”——促進動物體蛋白質(zhì)沉積、促進脂肪分解抑制脂肪沉積，能顯著提高胴體的瘦肉率、增重和提高飼料轉(zhuǎn)化率，因

2、此曾被用作牛、羊、禽、豬等畜禽的促生長劑、飼料添加劑。1ug/mL的鹽酸克倫特羅添加于豬飼料中用于促生長，人食用豬肝或豬肺足夠引起中毒。世界沒有任何正規(guī)機構(gòu)批準克倫特羅作為飼料添加劑用于動物促生長?！笆萑饩卑}酸克侖特羅在我國已經(jīng)被禁用。由于美國人不吃畜禽的內(nèi)臟，因此允許使用一定量的瘦肉精。摘要本實驗研究了14C標記的克倫特羅在雌雄大鼠體內(nèi)的代謝。喂食每只大鼠200μg/kg體重的14C克倫特羅，并在之后8天期間研究其代謝產(chǎn)物和過程。發(fā)現(xiàn)有大約60%的放射性物質(zhì)（14C）從尿液中排出，雄鼠和雌鼠分別有20%和30%的放射性物質(zhì)（14C）從糞便中排出。利用HPLC（高效液相色譜

3、法）檢測放射性物質(zhì)（14C）可以對克倫特羅的代謝產(chǎn)物進行鑒定和定量，發(fā)現(xiàn)尿液中的一些代謝產(chǎn)物是不穩(wěn)定的。大部分尿液和糞便中的克倫特羅代謝產(chǎn)物可以使用各種MS（質(zhì)譜）分析技術(shù)進行分離和鑒定。在大鼠被給藥后，分析方法也可以建立克倫特羅在糞便和組織中代謝產(chǎn)物長達72h的圖譜?？藗愄亓_的主要代謝過程包括：N-脫烷基化（仲胺），N-氧化和硫酸共軛（伯胺）。另外，對不同性別大鼠的克侖特羅代謝產(chǎn)物中N-脫烷基化比率的差異進行觀察。大鼠尿液中檢測到的主要代謝產(chǎn)物是4-N-羥胺，而糞便中的放射性物質(zhì)（14C）大多與氨基磺酸克侖特羅有關(guān)。實驗材料和方法1.實驗試劑：克倫特羅和用于標記的分子[14C]

4、CL[4-氨基-3,5-二氯-α-[（叔丁基氨基甲基）]芐基醇。甲酸、乙酸、解旋酶、VI型硫酸、D型葡糖二酸-1,4-內(nèi)酯。2.實驗動物：8只成年大鼠（4只雄性和4只雌性）。3.實驗樣品的采集：大鼠的排泄物的采集：8只成年大鼠被單獨飼養(yǎng)在不銹鋼籠中。允許大鼠自由飲水并且有一個標準的日常飲食。大鼠的平均重量分別為42721g（雄性）和29924g（雌性）。一周的環(huán)境適應(yīng)期后，每只大鼠被強制喂食200μg/kg體重的14C標記的克倫特羅。后面的8天，每天把尿液和糞便收集起來備用。最后，大鼠被放血致死。鼠籠要單獨用500ml的甲醇/水（1：1，v/v）清洗干凈，并從中取1ml作為樣品做

5、放射性物質(zhì)測定。取下肝臟，如果不立即使用，這些樣品都要儲存在-20℃下。組織樣品的采集：4只雄性大鼠（年齡，10周）被安置在如上文所述的環(huán)境中。分別在喂食克侖特羅后12h，24h，48h和72h通過放血處死大鼠。切除肝，肺和腎并存儲在-20℃下。鹽酸克倫特羅劑量的影響：3只雄性大鼠（年齡，10周）被安置在如上所述環(huán)境中。分別強制喂食5，20，40mg/kg體重14C標記的克侖特羅。3天內(nèi)，每天收集3次尿液和糞便并儲存在-20℃下用于研究。4.儀器設(shè)備：主要有HPLC（高效液相色譜儀）、放射性物質(zhì)檢測器、吉爾森模型202餾分收集器、UV（紫外）分光光度計、帕卡德液體閃爍計數(shù)器。5.

6、實驗過程：尿液：尿液樣品與甲醇混合（1：2，v/v），攪拌，以10000rpm（4℃）離心10min，將沉淀物丟棄，上清液在真空下濃縮并用微孔濾膜（0.5g，0.45μm）過濾，最后用HPLC進行分析。糞便：通過初步分析這4只大鼠的糞便來確定大鼠組織中瘦肉精代謝產(chǎn)物的概況，目的是判斷大鼠糞便中是否存在不穩(wěn)定或揮發(fā)性的克侖特羅代謝產(chǎn)物。冷凍干燥前后的這些糞便樣品中的放射性物質(zhì)含量需要通過完全燃燒和液體閃爍計數(shù)器來確定。通過對糞便提取物進行分析，比較新鮮和凍干樣品中克侖特羅代謝產(chǎn)物。研究期間將每天收集到的大鼠糞便進行冷凍干燥，然后利用球磨床均質(zhì)化，再對每個樣品中的14C進行測定。將大

7、約0.5g的冷凍干燥樣品與甲醇/100mM的乙酸銨混勻2min，pH值3.2（1：6：3，w/v/v），然后在10000rpm下（4℃）離心10min。將沉淀再用相同的溶劑混合萃取兩次，再與甲醇/1mM的氫氧化銨（1：6：3，w/v/v）混均萃取一次。放射性物質(zhì)計數(shù)完成后，將4個上清液合并，用異辛烷去脂，并在N2條件下濃縮。將所得提取物在微濾膜（0.5g，0.45μm）下進行過濾，然后利用HPLC進行分析，最后通過燃燒分析來確定離心沉淀中的放射性物質(zhì)殘留。對每只大鼠的2天和3天的