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《sd118-2對(duì)人hepg2細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期影響及其作用機(jī)制》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文SD118--2對(duì)人HepG2細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期影響及其作用機(jī)制姓名：戴焱焱申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：陳若華201205SDll8—2對(duì)人HepG2細(xì)胞增殖、細(xì)凋亡、細(xì)胞周期影響及機(jī)制探討摘要研究背景：肝細(xì)胞癌(HCC)，是全球癌癥死亡的主要腫瘤之一，也是肝硬化患者的主要死因。HCC的發(fā)病率近年來不斷增加，每年有50萬一100萬新增患者【l】。HCC的早期診斷及有效治療對(duì)延長(zhǎng)肝細(xì)胞癌患者生存時(shí)間起到重要的作用。肝移植及肝臟外科切除術(shù)是目前最常用的治療方法，但是由于肝源的缺少及術(shù)后
2、高復(fù)發(fā)率致使這些治療方法在臨床上沒有取得顯著療效，也增加了患者的痛苦及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)?；熓悄壳皩?duì)于不適應(yīng)外科手術(shù)病人的輔助治療方法之一，然而化療的臨床治療效果不是很顯著。例如，阿柔比星是臨床治療肝癌的標(biāo)準(zhǔn)藥物，對(duì)身體具有很大的副作用，在延長(zhǎng)生存時(shí)間方面也沒有顯著的療效【21。近半個(gè)世紀(jì)以來，人們一直致力于自天然植物中提取藥物用于臨床癌癥的治療，并證實(shí)其臨床效果較顯著。化合物SDll8粗提自中國(guó)南海深海處藻類等沉積物中，其經(jīng)過提純后分為15種成分，成分I(青黃霉素X)即為SDll8．2。研究證實(shí)SDll8．2對(duì)人MCF．7、H印G2
3、、NCI．H460、HeLa等細(xì)胞的活性具有抑制作用，其中對(duì)人H印G2細(xì)胞的細(xì)胞毒性更顯著【31。研究目的：觀察化合物SDll8．2對(duì)人H印G2細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響。研究化合物SDll8．2誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。研究方法：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人H印G2細(xì)胞，分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組給予7p咖LSDll8—2作用于人H印G2細(xì)胞，對(duì)照組給予O．7％DMSo處理?；衔颯Dll8．2的IC50是7p咖L。1、采用MTT法檢測(cè)SDll8．2對(duì)正常人肝臟細(xì)胞、人H印G2細(xì)胞增殖影響：7pg／mL化合物SDl18．2分別作用于
4、人正常肝臟細(xì)胞、人H印G2細(xì)胞48h后通過酶標(biāo)儀570姍波長(zhǎng)測(cè)每孔的吸光度值。細(xì)胞增殖率=(實(shí)驗(yàn)組吸光度均值)／(對(duì)照組吸光度均值)×100％。第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文2、采用DAPI熒光染色法觀察化合物SDll8．2處理后細(xì)胞形態(tài)的變化：7pg／mLSDll8．2分別作用于人H印G2細(xì)胞12h、24h、48h后DAPI染色，通過熒光顯微鏡激發(fā)觀察人H印G2細(xì)胞不同時(shí)間段形態(tài)變化。3、檢測(cè)細(xì)胞凋亡率：7p咖LSDll8—2分別作用于人HepG2細(xì)胞12h、24h、48h，通過流式細(xì)胞儀加mexinV．FITC／PI雙標(biāo)法檢測(cè)化
5、合物SDll8．2誘導(dǎo)人H印G2細(xì)胞凋亡率。4、檢測(cè)細(xì)胞周期阻滯：7“g／mLSDll8-2分別作用于人H印G2細(xì)胞12h、24h、48h，通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)化合物SDll8—2引起人HepG2細(xì)胞周期阻滯。5、采用JC．1染色法檢測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位(△甲m)水平：7p∥mLSDll8．2分別作用于人H印G2細(xì)胞12h、24h、48h，使用JC．1染色，通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位的變化。6、WestemBlot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bcl一2、Bax、PAI沖、C．P舢心表達(dá)變化：7pg／mLSDll8．2分別作用于人H印G
6、2細(xì)胞12h、24h、48h，收集細(xì)胞、提取蛋白，通過WestenlB10t檢測(cè)化合物作用于人H印G2細(xì)胞后凋亡相關(guān)蛋白的變化。研究結(jié)果：化合物SDll8-2呈時(shí)間依賴性改變?nèi)薍印G2細(xì)胞形態(tài)、抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)、降低細(xì)胞線粒體膜電位、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞G2期阻滯；抗凋亡蛋白Bcl．2表達(dá)呈時(shí)間依賴性減少，促凋亡蛋白Ba】【、C．PAl沖表達(dá)呈時(shí)間依賴性增加：化合物SDll8—2對(duì)正常肝細(xì)胞增殖無顯著影響。研究結(jié)論：化合物SDll8—2可選擇性影響人肝癌H印G2細(xì)胞增殖，但對(duì)人正常肝細(xì)胞影響不顯著；可通過細(xì)胞G2期阻滯和誘導(dǎo)細(xì)胞凋
7、亡抑制人H印G2細(xì)胞增殖，并通過下調(diào)Bcl．2蛋白表達(dá)、上調(diào)Ba)【、C—PAl沖蛋白表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。化合物SDll8—2具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，并能使細(xì)胞周期進(jìn)程發(fā)生變化。關(guān)鍵詞：sDll8．2，HepG2細(xì)胞，細(xì)胞凋亡，細(xì)胞周期，線粒體膜電位，Bcl．2，Bax'PARP．C-PARPSDll8—2對(duì)人HepG2細(xì)胞增殖，細(xì)凋亡、細(xì)胞周期影響及機(jī)制探討ResearchBacl嚕round：AbstractH印patocellularcarcinoma(HCC)，isoneoftheprimaD，nunordeaths
8、intlleworld，趾dalsooneofthemaincauseofdeatllinpatientswitll1ivercimlosis．Theincid∞ceofHCCincrc嬲edcontinuouslyinrecentyears，thereare500000to
