流產(chǎn)布氏桿菌s19株bp26基因標(biāo)記疫苗株構(gòu)建及免疫原性初步的研究

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1、摘要摘要布氏桿菌病是一種在世界范圍內(nèi)廣泛流行并造成嚴(yán)重危害的人畜共患病,布氏桿菌是布氏桿菌病的病原體,它是一種胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性球桿菌,無(wú)芽抱,有莢膜,無(wú)鞭毛不能運(yùn)動(dòng),不呈兩極染色。布氏桿菌病的特點(diǎn)是,一旦發(fā)病并轉(zhuǎn)入慢性就無(wú)法根治,因此,布氏桿菌病的預(yù)防對(duì)于控制布氏桿菌病是非常重要的,預(yù)防主要通過(guò)接種疫苗實(shí)現(xiàn)的。我國(guó)目前使用比較廣泛的減毒活疫苗株有牛流產(chǎn)布氏桿菌S19弱毒疫苗,馬耳他布氏桿菌M5弱毒疫苗,以及豬布魯氏菌S2弱毒疫苗等。在這些疫苗株的使用中還發(fā)現(xiàn),它們具有交叉免疫保護(hù)效果,但是,也發(fā)現(xiàn)了一個(gè)比較嚴(yán)重的缺點(diǎn)

2、,即減毒活疫苗在抗原上與強(qiáng)毒菌株沒(méi)有大的區(qū)別,而布氏桿菌病監(jiān)測(cè)和檢疫中主要采取基于S-LPS抗原“O”鏈特異性抗體而建立的免疫學(xué)方法,因此,無(wú)法區(qū)分是自然感染還是人工免疫,這就很難得出正確的監(jiān)測(cè)和檢疫的結(jié)果,給檢測(cè)和檢疫帶來(lái)很大的困難。如何解決現(xiàn)有疫苗的這以主要問(wèn)題,對(duì)于布氏桿菌病的防控具有重要的意義。BP26蛋白是布氏桿菌的一個(gè)非常重要的診斷抗原,已有很多用此抗原來(lái)進(jìn)行布氏桿菌診斷的報(bào)道。BP26蛋白作為布氏桿菌的一個(gè)周質(zhì)蛋白,對(duì)布氏桿菌的毒力不起決定性的作用,但確是布氏桿菌的一個(gè)優(yōu)勢(shì)抗原,能夠誘導(dǎo)高滴度的抗體。BP2

3、6蛋白的這些特性,為我們進(jìn)行研究基因標(biāo)記疫苗研究提供了很好的靶標(biāo)。如果對(duì)該抗原進(jìn)行缺失標(biāo)記,將為鑒別診斷方法的建立提供標(biāo)識(shí)序列。因此,本項(xiàng)目擬利用同源重組的方法,對(duì)牛流產(chǎn)布氏桿菌S19弱毒疫苗進(jìn)行改造,構(gòu)建成bp26基因缺失的標(biāo)記疫苗株,命名為S19-△26。小鼠感染模型表明,標(biāo)記疫苗株S19-△26與親本株S19具有同樣的安全性,殘留毒力沒(méi)有因BP26蛋白的缺失而發(fā)生改變,同時(shí)S19-△26免疫的小鼠一直沒(méi)有出現(xiàn)BP26特異性抗體,為鑒別診斷提供可行性。在小鼠免疫保護(hù)試驗(yàn)中,S19-△26和S19接種的小鼠具有同樣抵抗

4、S544強(qiáng)毒菌株攻擊的能力。S19-△26具備從血清學(xué)角度區(qū)分S19-△26免疫與野生型布氏桿菌感染,對(duì)布氏桿菌病防制、監(jiān)測(cè)及凈化具有重要的意義。關(guān)鍵詞S19-△26;S19;bp26基因;小鼠模型IAbstractConstructionOfBP26GeneMarkerStrainBrucellaAbortusS19EvaluationOfTheImmunogenicityInMiceAbstractBrucellosis,whichiscausedbyBrucella,isoneofthemostimportantb

5、acterialzoonosisendemicinmanycountries.Brucellaspp.isthepathogenofbrucellosis.Brucellaarefacultativeintracellular,gram-negativecoccobacilliwithoutspore,flagellaandcapsule.OneimportantcharacteristicsofBrucellosisisthatonceinfected,itishardtocurecompletely.Therefor

6、e,preventionisthemostimportantmeanstocontrolit.Vaccinationismostefficientmeansforbrucellaprevention.Thevaccineswidelyusedinourcourtyareliveattenuatedvaccinestrains,suchasBrucellaabortusS19,BrucellamelitensisM5andBrucellasuisS2.Itisfoundthatthesevaccineshavecrossi

7、mmunity.However,thesevaccinesalsohavesomelimitationsordefects.Forexample,aimportantdefectofthesevaccinesisthat,theyhaveverysimilarantigenicitytovirulentstrains,andtherefore,itisverydifficulttodifferentiatetheimmunizationfrominfection.Therefore,howtoresolvethesepr

8、oblemsofthesevaccinesisimportantforbrucellosisprevention.BP26isanimportantdiagnosticantigenforBrucella.ItisextensivelyusedinBrucelladiagnosis.BP26isaperiplasmi

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