羅非魚促鈣吸收肽的制備分離及生物活性研究.pdf

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1、上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼：10264研究生學(xué)號(hào)：M150250461上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文題目：羅非魚促鈣吸收肽的制備分離及生物活性研究英文題目：Preparationandseparationcalcium-bindingpeptidefromtilapiaproteinhydrolysateanditsbioavailability專業(yè)：食品工程研究方向：水產(chǎn)品加工與質(zhì)量安全姓名：張金楊指導(dǎo)教師：李來好研究員二零一八年五月上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯委員會(huì)成員名單姓名工作單位職稱備注孫恢禮中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所研究員主席曾慶祝廣州大學(xué)

2、化學(xué)化工學(xué)院教授委員徐石海暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院教授委員郝淑賢中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所研究員委員戚勃中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所副研究員委員岑劍偉中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所副研究員委員魏涯中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所副研究員秘書答辯地點(diǎn)南海水產(chǎn)研究所答辯日期2018.5.29上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文二零一八年五月上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容

3、。論文為本人親自撰寫，我對(duì)所寫的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密□學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文羅非魚促鈣吸收肽的制備分離及生物活

4、性研究摘要羅非魚（Tilapia）作為一種富含蛋白質(zhì)和氨基酸的優(yōu)秀水產(chǎn)生物資源，不僅是飲食中良好的蛋白質(zhì)來源，也是制備一系列生物活性物質(zhì)潛在的優(yōu)質(zhì)原料。本文以羅非魚為原料，利用蛋白酶對(duì)其進(jìn)行酶解，2+研究了酶解產(chǎn)物的分子量分布、Ca結(jié)合能力以及抗氧化活性，采用2+固定化金屬螯合層析對(duì)具有高Ca結(jié)合能力的酶解物進(jìn)行純化，研究其在Caco2細(xì)胞上的轉(zhuǎn)運(yùn)吸收，有望得到一種以羅非魚為原料的補(bǔ)鈣制劑，一定程度上豐富了羅非魚深加工理論。具體結(jié)果如下：2+1.以Ca結(jié)合活性為指標(biāo)，研究比較中性蛋白酶、Alcalase2.4L、胰蛋白酶三種蛋白酶酶解羅非魚的產(chǎn)物的結(jié)合能力。三種蛋白酶水解度

5、依次為10.5%、10.25%和7.41%的酶解產(chǎn)物鈣離子結(jié)合活性達(dá)到最高，此條件下，酶解物結(jié)合率為胰蛋白酶>Alcalase2.4L>中性蛋白酶，2+水解度為7.41%的酶解產(chǎn)物具有最高的Ca的結(jié)合活性，其結(jié)合率為78.71%。氨基酸分析結(jié)果顯示：羅非魚肉中氨基酸含量較為豐富，其中谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸和精氨酸等氨基酸含量較高，具有高鈣離子結(jié)合活性的酶解產(chǎn)物谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、絲氨酸等與礦物離子結(jié)合能力有關(guān)的氨基酸含量大幅度增加。2.高效體積排阻色譜測(cè)定中性蛋白酶、Alcalase2.4L、胰蛋白酶三種蛋白酶酶解羅非魚肉所得產(chǎn)物的分子量分布情況，比較小分子肽段（<

6、3kDa）所占比例，以及初始出峰時(shí)間。結(jié)果顯示：相同酶解程I上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文度情況下，酶解產(chǎn)物中<3kDa的組分占比依次是Alcalase2.4L>中性蛋白酶>胰蛋白酶，初始出峰時(shí)間為胰蛋白酶>中性蛋白酶>Alcalase2.4L。3.以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率、羥自由基清除率和還原力等抗氧化活性指標(biāo)，研究比較中性蛋白酶、Alcalase2.4L、胰蛋白酶三種蛋白酶酶解羅非魚肉所得酶解物的抗氧化活性的差異，結(jié)果顯示：中性蛋白酶水解度為14.18%的酶解產(chǎn)物具有最高的抗氧化活性，其DPPH自由基清除率最高可達(dá)93.11%，羥自由基清除率為

7、72.45%，還原力為0.88。Alcalase2.4L水解度為12.84%的酶解產(chǎn)物獲得了最高的抗氧化活性，而水解度為10.1%的胰蛋白酶酶解產(chǎn)物具有最高的抗氧化活性，且三種酶的酶解產(chǎn)物的抗氧化活性都隨酶解時(shí)間的增加呈先上升后下降的趨勢(shì)。2+4.具有最高Ca結(jié)合能力的酶解物具有較高的抗氧化活性，其DPPH自由基清除率，羥自由基清除率和和還原力分別為81.79%、2+47.97%、0.45，與Ca結(jié)合后的結(jié)合物也顯示了一定的抗氧化能力，2+其Ca結(jié)合物DPPH自由基清除率為77.35%，羥自由基清除率為2+32.5