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1、分類號：密級：公開學號：2015202347單位代碼：10759石河子大學碩士學位論文高富硒酵母的篩選與富硒過程強化研究學位申請人婁興丹張根林副教授指導教師葉邦策教授申請學位門類級別醫(yī)學碩士學科、專業(yè)名稱天然產(chǎn)物化學研究方向天然產(chǎn)物資源化利用所在學院化學化工學院中國·新疆·石河子2018年6月ScreeningandEnhancementofSelenium-enrichedYeastADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillme
2、ntoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByLouXing-dan(ChemistryofNaturalProduct)DissertationSupervisor:Prof.ZhangGen-linProf.YeBang-ceJune,2018摘要硒是人體必需的微量元素，多種慢性疾病如癌癥和心臟病與缺乏硒有關(guān)，為了降低這些疾病的風險，補充硒是一個很好的選擇。由于富硒酵母生物利用度高且有較高的食品安全性，硒酵母在醫(yī)藥和保健行業(yè)有著重要的應(yīng)用。但
3、是酵母富硒研究中仍然存在富硒能力不穩(wěn)定、富硒量與生物量不適配等問題，已成為制約富硒產(chǎn)品發(fā)展的瓶頸。為了提高酵母對硒的富集能力，本研究以新疆富硒土壤為樣品來源，篩選富硒能力與耐受性較優(yōu)的富硒酵母菌株，探究酵母富硒和生長的最佳工藝條件，期望提出一種高生物量和高富硒量的平衡培養(yǎng)方法，研究結(jié)果如下：從新疆天山北坡沙灣縣境內(nèi)采集富硒土壤樣品50份，通過馬丁培養(yǎng)基的初篩和富硒能力復篩，獲得了一株富硒量和生物量相對較高的酵母菌株，富硒量為790μg/gDCW，生物量為4.64g/L。利用18SrDNA序列分析和菌株
4、形態(tài)學鑒定，確定該酵母菌株為粘紅酵母Rhodotorulaglutinis，命名為X-20，保藏到中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCCM2017225。優(yōu)化了R.glutinisX-20菌株的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件，最后確定富硒酵母的培養(yǎng)條件為：溫度30℃，初始pH=7，接種量1%，裝液量50mL/250mL，培養(yǎng)時間60h。利用2%甘油作為碳源時，可顯著提高酵母中硒的累積，培養(yǎng)12h時添加50μg/mL的亞硒酸鈉能夠保證酵母具有較高的硒累積量和生物量，添加0.4mM的磷酸鹽可以有效地促進硒的轉(zhuǎn)運和累
5、積，使R.glutinisX-20富硒量達到3909μg/g，生物量達4.23g/L。并利用甘油補料發(fā)酵方式，使得粘紅酵母的富硒產(chǎn)量比補料前提高了17.2%。研究了酵母生長和富硒能力的平衡培養(yǎng)方法，發(fā)現(xiàn)將異源磷酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白Pho84轉(zhuǎn)入R.glutinisX-20中調(diào)節(jié)細胞內(nèi)硒的轉(zhuǎn)運，可有效地增加硒的累積，使酵母富硒量達到5000μg/g，生物量提高了11.2%。通過甘油與葡萄糖（比例為3:7）這種簡單的混合碳源培養(yǎng)方法，使生物量和富硒量分別達到5.3g/L和5349.6μg/g，實現(xiàn)了生長和富硒的平
6、衡。關(guān)鍵詞：粘紅酵母；高生物量；富硒；磷酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白IAbstractSelenium(Se)isanessentialtraceelementforhumans,andSedeficiencyislinkedtoseveralchronicdiseasessuchascancerandheartdisorders.Inordertoreducetheriskofthesediseases,Sesupplementationinthedietisagoodoptioninmostcircumstanc
7、es,sothatSe-enrichedyeasthasanimportantapplicationinmedicalcareandpharmaceuticalindustryduetoitshighbioavailabilityandsafetyinfoodadditives.Se-enrichedyeastisdifficulttocarryoutlarge-scaleandefficientindustrialproductionofseleniumenrichedyeast,whichrest
8、rictsthewideapplicationofseleniumenrichedyeastduetoyeastofunstableabilityrich-selenium,seleniumaccumulativeandgrowthdiscomfortinthestudyofseleniumenrichedyeast.Inordertoimprovetheabilityofyeasttoenrichselenium,thepaperstudiesthes
