激光掃描共聚焦顯微鏡(lscm)技術(shù)簡介new

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1、-www.bioo.com激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)是隨著光學、視頻、計算機等技術(shù)的迅速發(fā)展而誕生的一種高科技產(chǎn)品。它是在熒光顯微鏡成像基礎(chǔ)上加裝了激光掃描裝置,利用計算機進行圖像處理,使用紫外或可見光激發(fā)熒光探針,從而得到細胞或組織內(nèi)部微om細結(jié)構(gòu)的熒光圖像,成為形態(tài)學專心做生物﹑分子.細c胞生物學﹑神經(jīng)科學﹑藥理學﹑遺傳學等領(lǐng)域新一代-強有ioo力的研究工具。同時,激光掃描共聚焦顯微鏡也是活細胞的動態(tài)觀察、多重免疫熒光標記和離子.bb熒光標記觀察的有力工具。不僅可對活的或固定的細胞及組織進生物秀行無損傷的“光學切片www”;進行單標記或雙標記細胞及組織標本的熒光定性定量分

2、析;還可用于活細胞生理信號,離子含量的實時動態(tài)分析監(jiān)測,粘附細胞的分選,細胞激光顯微外科和光陷阱技術(shù)等。可以無損傷的觀察和分析細胞的三維空間結(jié)構(gòu)。生物秀論壇-學術(shù)交流、資源共享與互助社區(qū)bbs.bbioo.com生物秀-專心做生物www.bbioo.comIntroductionLSCM是一種高科技顯微鏡熒光顯微鏡成像為基礎(chǔ),加裝了激光掃描裝置,計算機進行圖像處理,使用紫外或可見光激發(fā)熒光探針,得到細胞或組織專心做生物內(nèi)部微細結(jié)構(gòu)的熒光圖像。-無損傷的“光學切片”生物秀細胞三維立體機構(gòu)www.bbioo.com實時動態(tài)分析監(jiān)測激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)是隨著光學、視頻、計算機

3、等技術(shù)的迅速發(fā)展而誕生的一種高科技產(chǎn)品。生物秀論壇-學術(shù)交流、資源共享與互助社區(qū)bbs.bbioo.com生物秀-專心做生物www.bbioo.comLSCM的基本組成光學顯微鏡部分激光發(fā)射器掃描裝置專心做生物-光檢測器計算機系統(tǒng)生物秀www.bbioo.com(包括數(shù)據(jù)采集,處理,轉(zhuǎn)換,應(yīng)用軟件)圖像輸出設(shè)備生物秀論壇-學術(shù)交流、資源共享與互助社區(qū)bbs.bbioo.com生物秀-專心做生物www.bbioo.comLSCM的原理激光光源:激光掃描束經(jīng)照明針孔形成點光源,普通顯微鏡采用的自然光或燈光是一種場光源,標本上每一點的圖像都會受到鄰近點的衍射光或散射光的干擾。而LSCM以

4、激光為光源,激光具有單色性強﹑方向性好﹑高亮度﹑相干性好等優(yōu)點,可以避免普通顯微鏡的缺點。一般常用的氣體激光器如氬(Ar)﹑氪(Kr)﹑氦(He)﹑氖(Ne)。illuminatingpinhole:照明針孔功能:使激光經(jīng)過照明針孔后形成點光源,點光源具有光源方向性強、發(fā)散小、亮度高、高度的空間和時間相干性以及平面偏振激發(fā)等獨特的優(yōu)點。且與detectorpinhole(探測器針孔)及焦平面形成共聚焦裝置。-專心做生物分光鏡(BeamSplitter):點光源發(fā)出的光經(jīng)分光鏡反射后,通過物鏡在樣品聚焦。對標本內(nèi)焦平面上的每一點進行掃描,Focalplane:焦平面生物秀功能:激光點

5、光源照射物體在焦平面處聚焦,激發(fā)熒光標www.bbi記oo的樣.本發(fā)射com熒光,形成焦點光斑。該光斑經(jīng)過物鏡和分光鏡等一系列裝置的處理,分別在照明針孔及探測針孔兩處聚焦。共聚焦的含義由此而來。標本上的被照射點所發(fā)射的熒光沿同一光路進入物鏡,穿過分光鏡后在探測針孔處成像,該點以外的任何發(fā)射光均被探測針孔阻擋。然后經(jīng)探測針孔后的光電倍增管(PMT)或冷電感耦合器件(cCCD)逐點或逐線接收,將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘枺瑐鬏斨劣嬎銠C,迅速在屏幕上形成熒光圖像。關(guān)鍵在于:照明針孔與detectorpinhole(探測器針孔)及焦平面形成共聚焦裝置。生物秀論壇-學術(shù)交流、資源共享與互助社區(qū)bbs

6、.bbioo.com生物秀-專心做生物www.bbioo.com專心做生物-生物秀www.bbioo.com通過調(diào)節(jié)分光鏡(一般是調(diào)節(jié)反光鏡),調(diào)節(jié)光路,使激發(fā)光的焦點恰好通過探測器針孔,隨后進入光電倍增管。不在針孔處聚焦的光不能通過。生物秀論壇-學術(shù)交流、資源共享與互助社區(qū)bbs.bbioo.com生物秀-專心做生物www.bbioo.comLSCM對生物樣品的觀察的優(yōu)越性:連續(xù)掃描三維離子熒光標記同時多重物質(zhì)標記專心做生物-在對生物樣品的觀察中,激光共聚焦顯微鏡有如下優(yōu)越性:①對活細胞和組織或細胞切片生物秀進行連續(xù)掃描,可獲得精細的細胞骨架、染色體、細胞器和細胞膜系統(tǒng)的三維圖像

7、。www.bbioo.com②用熒光標記細胞內(nèi)的離子,可以單標記一種離子也可以多標記幾種離子,檢測細胞內(nèi)如pH和鈉、鈣、鎂等離子濃度的比率及動態(tài)變化。③用熒光標記探頭標記的活細胞或切片標本的活細胞生物物質(zhì),通過對膜上、胞漿內(nèi)多種免疫物質(zhì)的標記,可以實現(xiàn)在同一張樣品上同時進行多重物質(zhì)標記,同時觀察這些物質(zhì);④對細胞檢測無損傷、精確、準確、可靠、重復(fù)性優(yōu)良;數(shù)據(jù)圖像可及時輸出或長期儲存。生物秀論壇-學術(shù)交流、資源共享與互助社區(qū)bbs.bbioo.com生物秀-專心做生物w

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