應(yīng)用實(shí)時熒光定量pcr的mirna芯片技術(shù)研究脂肪肉瘤的mirna表達(dá)差異譜

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1、萬方數(shù)據(jù)復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文橇里大學(xué)碩士學(xué)位論文應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR的miRNA芯片技術(shù)研究脂肪肉瘤的miRNA表達(dá)差異譜TheMicroRNAexpressdifferencespectrumofLiposarcomabyusingEve——GreenbasedRT——PCRMicroRNAaSsay院系：復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院專姓業(yè)：外科學(xué)名：黃媛指導(dǎo)教師：陸維祺主任醫(yī)師導(dǎo)師組成員：周宇紅主任醫(yī)師童漢興主治醫(yī)生完成日期：2013年4月7曰萬方數(shù)據(jù)復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要???????????????????．1英文摘要

2、???????????????????．3前言????????????????????．．6實(shí)驗(yàn)部分???????????????????11第一部分、MIRNAS表達(dá)差異譜的建立???????????111、實(shí)驗(yàn)材料與方法???????????????．1l2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果?????????????????．183、討論??????????????????．．35第二部分、8個MIRNAS的細(xì)胞驗(yàn)證???????????．．381、實(shí)驗(yàn)材料與方法???????????????．382、實(shí)驗(yàn)結(jié)果?????????????????423

3、、討論??????????????????．．44結(jié)論????????????????????．45參考文獻(xiàn)???????????????????46綜述????????????????????．51附錄????????????????????．58致謝????????????????????．59文章及課題??????????????????．60萬方數(shù)據(jù)復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR的miRNA芯片技術(shù)研究脂肪肉瘤的miRNA表達(dá)差異譜背景與目的：軟組織腫瘤(softtissuesarcomas，STS)是

4、一類很少見的腫瘤，具有多種組織類型。而在這些組織類型中最多見的是脂肪肉瘤。脂肪肉瘤發(fā)生在后腹膜，可以很長一段時間沒有任何癥狀，脂肪肉瘤最大的特點(diǎn)就是易于復(fù)發(fā)，較少轉(zhuǎn)移。根據(jù)2002年WHO對脂肪肉瘤的分類標(biāo)準(zhǔn)，脂肪肉瘤分為5個組織亞型，歸類為3個生物學(xué)類型：1)高分化脂肪肉瘤和低分化脂肪肉瘤；2)粘液細(xì)胞型／圓型細(xì)胞型脂肪肉瘤；3)多形性脂肪肉瘤。去分化脂肪肉瘤、圓型細(xì)胞型脂肪肉瘤和多形性脂肪肉瘤被認(rèn)為是惡性程度較高、侵襲性較強(qiáng)的種類；而粘液細(xì)胞型脂肪肉瘤及高分化脂肪肉瘤則被認(rèn)為是低度惡性種類。手術(shù)的完整切除是現(xiàn)今治療的基石。切緣

5、陰性(卜2cm)代表良好的結(jié)果，但是脂肪肉瘤大都發(fā)生于后腹膜，因此完整切除困難，更加大了復(fù)發(fā)的可能。目前化學(xué)療法以及放射療法多用于輔助治療，但除了MLS／RCLS外療效較差，因此現(xiàn)在急切需要發(fā)展新的靶向治療方法。microRNAs(miRNAs)是一類含有18—24個核苷酸(nt)的單鏈RNA，負(fù)向調(diào)節(jié)靶向mRNAs的表達(dá)。MiRNAs的表達(dá)異?？梢愿淖兗?xì)胞的分化，引起腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，miRNAs可以作為癌基因和抑癌基因存在，已經(jīng)有多種靶向miRNA的抗腫瘤藥物研發(fā)出來應(yīng)用于臨床，并且取得較好療效?，F(xiàn)今在脂肪肉瘤領(lǐng)域

6、，miRNAs的研究非常少，本研究用miRNA高通量芯片對25例脂肪肉瘤組織，18例脂肪肉瘤患者的正常深部脂肪組織(距離腫瘤邊緣大于5cm)和16例脂肪瘤肉瘤旁組織(距離腫瘤邊緣小于lcm)進(jìn)行miRNA的篩選，分析脂肪肉瘤間的特異性miRNA表達(dá)差異譜，為未來的進(jìn)一步探索與其相關(guān)的分子機(jī)制，尋找新的治療靶點(diǎn)開發(fā)新藥研究做鋪墊。方法：應(yīng)用基于實(shí)時熒光定量PCR的miRNA芯片技術(shù)，對25例脂肪肉瘤組織，18例脂肪肉瘤患者的正常深部脂肪組織(距離腫瘤邊緣大于5cm)和16例脂肪瘤肉瘤旁組織(距離腫瘤邊緣小于lcm)進(jìn)行1920個mi

7、RNA的篩選，分析脂肪肉瘤問的特異性miRNA表達(dá)差異譜。應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR對部分表達(dá)差異的miRNAs在脂肪肉瘤和脂肪細(xì)胞中的表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果：對熒光定量PCR芯片結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，脂肪肉瘤和正常深部脂肪組織的miRNAs表達(dá)差異：40個miRNAs在脂肪肉瘤中表達(dá)增高，21個miRNAs表達(dá)降低；脂肪肉瘤和瘤旁脂肪組織的miRNAs表達(dá)差異：121個miRNAs存在表達(dá)差異；瘤旁脂肪組織和正常深部組織的miRNAs表達(dá)差異：9個miRNAs在瘤旁脂肪組織中高表達(dá)，2個低表達(dá)；脂肪肉瘤各亞型之間miRNAs表達(dá)存在差異。通

8、過SVM方法得出8個miRNAs(has—miR一369—3p，has—miR一196a，has—miR一135b，萬方數(shù)據(jù)復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文has—miR一376b，has—miR一486—5p，has—miR一486—3p，has—miR一4