Caveolin-1對人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系NCI-H446生長和侵襲作用的體外分析

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1、Caveolin一1對人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系NCI．H446生長和侵襲作用的體外研究碩士研究生：指導(dǎo)教師：指導(dǎo)小組：專業(yè)名稱：葉冬梅邵淑娟教授郝立宏副教授人體解剖學(xué)與組織胚胎學(xué)摘要目的：惡性腫瘤是當(dāng)今世界上嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病之一，肺癌發(fā)病率和死亡率位居惡性腫瘤之首。惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移所導(dǎo)致的多臟器功能衰竭是患者死亡的主要原因。目前，臨床上防止腫瘤轉(zhuǎn)移是治療腫瘤的關(guān)鍵之一。隨著對腫瘤分子生物學(xué)的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜而主動的生物學(xué)過程，它包括癌細(xì)胞在原發(fā)灶增殖、脫落、侵入轉(zhuǎn)移點(diǎn)并增殖，在這個過程中存在著癌基因的激活和抑癌基因的

2、失活等一系列遺傳學(xué)的改變。Caveolae是細(xì)胞膜內(nèi)陷形成的特殊膜結(jié)構(gòu)，參與細(xì)胞的物質(zhì)運(yùn)輸和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。Caveolin．1是Caveolae中的重要蛋白，與細(xì)胞內(nèi)多種信號分子相互作用。上世紀(jì)90年代后期有研究發(fā)現(xiàn)，Caveolin．1可以影響細(xì)胞的增殖、凋亡、惡性轉(zhuǎn)化及血管的生長：是近年來腫瘤研究的熱點(diǎn)之一，但是Caveolin．1與肺癌的相關(guān)研究較少，國內(nèi)外近乎沒有系列報道。本文旨在探討Caveolin．J基因?qū)θ诵〖?xì)胞肺癌細(xì)胞系NCI．H446生長和體外侵襲力的影響。方法：westernblot檢測Caveolin．1在人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549

3、、NCI．H460、NCI．H446中的表達(dá)。用脂質(zhì)體法將已構(gòu)建的Caveolin。J真核表達(dá)載體導(dǎo)入到Caveolin-1基因缺失的人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI．H446中，經(jīng)G418篩選獲得可穩(wěn)定表達(dá)Caveolin．J的人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞H．446Cavl陽性克隆和對照陰性克隆H．446neo。westernblot和免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定陽性克隆。用噻唑藍(lán)(MTT)法觀察細(xì)胞增殖，結(jié)晶紫染色光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，用Transwell小室法和劃痕實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞體外侵襲、遷移能力的變化。用westernblot和明膠酶譜方法檢測Caveolin．1蛋

4、白表達(dá)對MMP．3表達(dá)及酶活性的影響，用westernblot方法檢測Caveolin．1表達(dá)對E．cadherin表達(dá)的影響。結(jié)果：westernblot檢測在人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI．H446中Caveolin一1表達(dá)缺失。westernblot和免疫組織化學(xué)方法鑒定獲得穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞克?。宏栃钥寺-446Cavl和陰性克隆H．446neo。通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀測發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染目的基因后的細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了明顯改變，轉(zhuǎn)染前NCI．H446細(xì)胞較小，偽足短，細(xì)胞呈克隆生長；轉(zhuǎn)染后H446．Cavl細(xì)胞體積增大，多突起，細(xì)胞生長較分散不呈克隆樣生長。生長曲線

5、表明H446．Cavl細(xì)胞增殖水平明顯低于NCI—H446、H446neo細(xì)胞(P<0．05)。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明H446．Cavl細(xì)胞穿透Matrigel膠細(xì)胞數(shù)較陰性克隆H．446neo明顯增多(P

6、性明顯高于H446neo(P

7、關(guān)鍵詞：Caveolin．，基因小細(xì)胞肺癌腫瘤轉(zhuǎn)移2TheinfluenceofCaveolin．1onNCI．H446celllinegrowthandmetastasisinvitroMasterdegreecandidate：YeDongmeiSupervisor：ProfessorShaoShujnanVice—superisor：ViceProfessorHaoLihongMajor：HumanAnatomyandHistologyandEmbryologyAbstractObjeetive：Malignanttumorisoneof

8、themostdevastatingdiseasesthreateninghumanhealthnowadays，andaroundallofthem