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1、纖維素酶產(chǎn)生菌的鑒定及其混合發(fā)酵條件優(yōu)化 摘要：分離篩選到的４株纖維素酶活較高的菌株Ｄ６、Ｄ７、Ｂ７和Ｄ１，根據(jù)形態(tài)特征初步判斷為３株細(xì)菌、 1株放線菌，其１６ＳｒＤＮＡ序列同源性分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ｄ６、Ｄ７、Ｂ７與Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．的同源性為９９％，系統(tǒng)發(fā)育樹分析與Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．遺傳關(guān)系最近，Ｄ１與Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｚａｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓ的同源性為９９％，系統(tǒng)發(fā)育樹分析與Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｚａｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓ遺傳關(guān)系最近；對(duì)４株菌株進(jìn)行單獨(dú)與混合發(fā)酵培養(yǎng)，結(jié)果表明菌株組合Ｄ６／Ｄ７混合培養(yǎng)后的酶活顯著高于其單菌培養(yǎng)，其在培養(yǎng)溫度３７℃、培養(yǎng)基初始ｐ
2、Ｈ值為８．０、接種量為２％、Ｄ６／Ｄ７接種比例為２∶１下的酶活最高，可達(dá)到７９．４２Ｕ／ｍＬ?！ ￡P(guān)鍵詞：纖維素；篩選；混合培養(yǎng)；發(fā)酵條件 中圖分類號(hào)：Ｑ９３－３３１；ＴＱ９２文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８11403－0573-03 StudyonIdentificationofCellulose-DecomposingMicroorganismsandOptimumConditionsforTheirMixedCultivation ?。蹋眨伲酰澹椋幔?，ＬＩＵＫａｉ－ｎａｎ２，ＬＩＣｕｉ－ｐｉｎｇ３ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｏｕｒｓｔｒａｉｎｓｏｆ
3、ｍｉｃｒｏｂｅｓｗｉｔｈｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｈｉｇｈｃｅｌｌｕｌａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｎａｍｅｄａｓＤ６，Ｄ７，Ｂ７ａｎｄＤ１ｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄ；ａｎｄｐｒｉｍａｒｉｌｙｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓ３ｂａｃｔｅｒｉａａｎｄｏｎｅａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ．Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，ｔｈｅｈｏｍｏｌｏｇｙａｍｏｎｇｓｔｒａｉｎｓＤ６，Ｄ７，Ｂ７ａｎｄＢａｃｉｌｌｕｓｓp.ｗｅｒｅ９９％；ａｎｄｂｅｔｗｅｅｎＤ１ａｎｄＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｚａｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓｗａｓａｌｓｏ９９％．Ｔｈｅｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｂｕｉｌｔｏ
4、ｎｔｈｅ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｆｏｒｍｅｒｔｈｒｅｅｓｔｒａｉｎｓｈａｄｔｈｅｎｅａｒｅｓｔｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈＢacillussp．，ｗｈｉｌｅｔｈｅｌａｔｔｅｒｏｎｅｗａｓｎｅａｒｅｓｔｔｏＳ．ｚａｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓ．ＥｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｍｉｘｅｄｓｔｒａｉｎＤ６／Ｄ７ｗａｓｏｂｖｉｏｕｓｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｉｎ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｅｎｚｙｍｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅａｔ３７℃，ｗｉｔｈｍｅｄｉｕｍｐｒｉｍａｒｙｐＨ８．０，２％ｏｆｉｎｏｃｕｌａｔ
5、ｉｏｎ，ａｎｄｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎＤ６∶Ｄ７ａｔ２∶１．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｓｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｒｅａｃｈｅｄ７９．４２Ｕ／ｍＬ． ?。耍澹鳎铮颍洌螅海悖澹欤欤酰欤铮螅?；ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ；ｍｉｘｅｄｃｕｌｔｕｒｅ；ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ 纖維素是植物細(xì)胞壁的主要成分，是自然界儲(chǔ)存量最多的多糖類物質(zhì)，也是一筆取之不盡、用之不竭的可再生資源。因此，纖維素類物質(zhì)的分解利用對(duì)于解決未來的能源危機(jī)和環(huán)境污染意義重大［１］。自然狀態(tài)下，纖維素降解主要通過３種方式，即物理方式、化學(xué)方式和微生物降解［２］
6、，物理方法作用效果不明顯，化學(xué)方法成本高且易產(chǎn)生二次污染。實(shí)踐表明，纖維素的微生物降解是最佳途徑，此法具有降解率高、安全環(huán)保、成本低等優(yōu)點(diǎn)［３］。但是，由于天然纖維素分解菌活性低，降解速度慢，而纖維素降解需要多種酶協(xié)同作用，充分利用自然界多種微生物的協(xié)同關(guān)系，人工篩選構(gòu)建能夠產(chǎn)生多種纖維素酶的高效穩(wěn)定混合菌系，引起了人們的高度重視?！ ∧壳霸跇?gòu)建混合菌系，利用菌株協(xié)同作用降解纖維素的研究報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)對(duì)分離篩選到的４株纖維素酶活較高的菌株進(jìn)行不同菌株組合發(fā)酵，目的在于構(gòu)建一組高效纖維素降解菌系，初步確定其最適產(chǎn)酶條件以應(yīng)用于纖維素廢棄物處理，對(duì)減少環(huán)境污染、變廢為寶，實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)
7、的可持續(xù)發(fā)展具有一定的理論指導(dǎo)意義?！ 。辈牧吓c方法 ?。保辈牧稀 。保保本陙碓幢緦?shí)驗(yàn)室分離篩選獲得，分別為Ｄ６、Ｄ７、Ｂ７和Ｄ１?！ 。保保惨后w發(fā)酵培養(yǎng)基參照文獻(xiàn)［４］配方制作?！ 。保卜椒ā 。保玻本晷螒B(tài)觀察及系統(tǒng)發(fā)育分析①菌株的形態(tài)觀察結(jié)果。對(duì)菌株進(jìn)行革蘭氏染色，顯微鏡觀察各菌株形態(tài)，根據(jù)形態(tài)特征對(duì)菌株進(jìn)行初步分類。②菌株的１６ＳｒＤＮＡ的ＰＣＲ擴(kuò)增及序列分析。細(xì)菌的ＤＮＡ提取及ＰＣＲ擴(kuò)增和序列分析
