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《抗蛔蟲人源單鏈抗體庫的構建及鑒定.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、2011年6月湖南師范大學自然科學學報Vo1．34No．3第34卷第3期JournalofNaturalScienceofHunanNormalUniversityJun．，2011抗蛔蟲人源單鏈抗體庫的構建及鑒定千守杜何光志，田維毅'^八I工'奚錦，俞高(1．貴陽中醫(yī)學院基礎部，中國貴陽550002；2．遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院，中國遵義563003)摘要目的：構建抗蛔蟲人源單鏈抗體庫，從中篩選建抗蛔蟲人源特異性單鏈抗體．方法：分離10個患蛔蟲病人的淋巴細胞，提取總RNA反轉錄為cDNA，PCR擴增人抗體重鏈(VH)和輕鏈()
2、可變區(qū)基因，采用SOE-PCR法將VH和兒片段隨機拼高接成琦scFv片段，并克隆人噬菌粒載體pCANTAB5E中，構建噬茵體單鏈抗體庫．結果：初級庫庫容量為1．8X10，在大腸桿菌TG1中重組后得到1．6X10的次級抗體庫．結論：本研究成功構建抗蛔蟲人源單鏈抗體庫，擬在為蛔蟲英病，的乾王預防、診斷、治療奠定基礎．關鍵詞蛔蟲；單鏈抗體；構建及篩選中圖分類號R383．王11宇文獻標識碼A文章編號1000-2537(20l1)03-0077-05P平re黃parationandIdentificationofaHumanSing
3、leChainFvAntibodyAgainstAscarislumbricoidesHEGuang-zhihTIANWei—yi，GAO，WANGPing，，WANGWen-jia，脅，Qi，WANGQian-yu，HUANGGao(1．DepartmentofBasicCourses，GuiyangCoHegeofTraditionalChineseMedicine，Guiyang550002，China；2．AfiliatedHospitalofZunyiMedicalCollege，Zu~yi563003，Chin
4、a)Abstract0bjectiveToconstructhumanizephageantibodylibraryagainstAscarislumbricoidesandtoscreenspecificityscFvtoAscarislumbricoides．MethodsTotalRNAwasabstractedfromperipheralbloodlympho·cytesof20persons，andwasusedtoamplifyVHandVLgenebyRT—PCR．TheamplifiedVHandVLgen
5、esweresplicedtoformscFvgenewhichwasclonedintopCANTAB一5Ephagemid，andtheconstructedrecombinantphage—midwastransformedtoE．coliTG1toconstructhumannaturalsingle-chainantibodylibraryfromwhichpositivecloneswerescreened．ResultsAprimarylibraryof1．5X10andasecondlibraryof1．2
6、X10wereconstructed．ConclusionThisstudywastoprovideLISthebasisforradionuclideimagingandtherapyforascariasis．KeywordsAscarislumbricoides；single—chainantibody；preparationandidentification蛔蟲(AscarislumbricoidesLinnaeus，1758)也稱為人似蚓蛔蟲，蛔蟲病呈世界性分布，已經成為公共衛(wèi)生問題之一?．據報道，全世界約有14
7、．72億人感染蛔蟲【．我國是蛔蟲感染較嚴重的國家之一，近年全國人體重要寄生蟲病現(xiàn)狀調查資料顯示，全國感染蛔蟲人數(shù)為8593萬．蛔蟲對群眾健康和青少年兒童的生長發(fā)育危害較大引．收稿日期：2011-01-20基金項目：貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長資金資助項目(黔省專合字[2010150號)$通訊作者。E．mail：heguangzhi7711@sina．eom78湖南師范大學自然科學學報第34卷噬菌體抗體庫技術是抗體工程領域的最重要進展，各種小分子抗體相繼產生，在疾病的診斷與防治、自身免疫性疾病與病毒性疾病的鑒別研究、腫瘤的影像
8、分析和導向治療或基因治療等多個領域有著潛在的優(yōu)勢．該技術具有簡單易行、生產成本低、篩選容量大等優(yōu)點引．本研究采用噬菌體抗體庫這一生物學技術構建抗蛔蟲噬菌體展示單鏈抗體庫，擬在為以后應用于蛔蟲病的預防、診斷和治療方面奠定基礎．1材料與試劑1．1主要試劑淋巴細胞分離液，購自為天津灝洋生物制品公司；逆轉錄試劑
