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1、重組人干擾素生產(chǎn)工藝三組主要內(nèi)容干擾素概述基因工程假單胞桿菌的構(gòu)建與保藏（菌種）干擾素的發(fā)酵工藝過程干擾素的分離純化工藝過程干擾素概述干擾素的種類干擾素的理化性質(zhì)干擾素的生物學(xué)活性干擾素的臨床應(yīng)用干擾素的生產(chǎn)工藝路線干擾素概念：干擾素是一種細(xì)胞因子，它是機體感染病毒時，宿主細(xì)胞通過抗病毒應(yīng)答反應(yīng)，而產(chǎn)生的一組結(jié)構(gòu)類似、功能相近的低分子糖蛋白。簡稱IFN。發(fā)現(xiàn)：干擾素是1957年英國科學(xué)家Isaccs等發(fā)現(xiàn)的。他們把滅活的流感病毒作用于小雞細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞產(chǎn)生了一種可溶性物質(zhì)，這種物質(zhì)能抑制流感病毒，并且能干擾其它病毒的繁殖，因
2、此，他們將這種物質(zhì)稱為“干擾素”。以后科學(xué)家們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，機體對入侵的異種核酸（包括病毒）都產(chǎn)生干擾素以進(jìn)行防御。當(dāng)機體細(xì)胞受到病毒感染時，機體細(xì)胞產(chǎn)生干擾素，干擾病毒復(fù)制，它是機體抗病毒感染的防御系統(tǒng)。干擾素的理化性質(zhì)143-166aa；MW:18-40ku；pI:6.5-7.5；乙醚、氯仿敏感容易吸附玻璃、淀粉、醋酸纖維膜、瓊脂和塑料等介質(zhì)。Ⅰ型干擾素具有廣譜的抗病毒活性，對多種病毒如DNA病毒和RNA病毒均有抑制作用；但這種效應(yīng)不是直接的，而是通過對宿主細(xì)胞的作用引起的。①對干擾素敏感的細(xì)胞表面存在干擾素受體，該細(xì)胞核內(nèi)有“抗
3、病毒蛋白”基因，受干擾素作用后該基因活化，產(chǎn)生的抗病毒蛋白可阻止病毒mRNA翻譯，并促進(jìn)病毒mRNA降解。②干擾素能提高細(xì)胞表面MHCⅠ類分子的表達(dá)水平，受到病毒感染的細(xì)胞表面MHCⅠ類分子的增加有助于向Tc細(xì)胞遞呈抗原，引起靶細(xì)胞的溶解。③干擾素可增強NK細(xì)胞（自然殺傷免疫細(xì)胞）對病毒感染的殺傷能力。干擾素的生物學(xué)活性正常情況下組織或血清中不含干擾素，只有在某些特定因素的作用下才能誘使細(xì)胞產(chǎn)生干擾素。廣譜抗病毒活性機制干擾素合成及作用宿主細(xì)胞（白細(xì)胞）抗腫瘤作用機制Ⅰ型干擾素能抑制細(xì)胞的DNA合成，減慢細(xì)胞的有絲分裂速度；這種抑制
4、作用有明顯的選擇性，對腫瘤細(xì)胞的作用比對正常細(xì)胞的作用強500～1000倍。另外，Ⅱ型干擾素也可通過增強機體免疫機制、加強免疫監(jiān)督功能來實現(xiàn)其抗腫瘤效應(yīng)。干擾素原始品種價格在1000~2000多，產(chǎn)量很低。運用生物技術(shù)生產(chǎn)后的價格在40~60之間，而且產(chǎn)量也很樂觀，運用價值大大提升。免疫調(diào)節(jié)活性機制免疫調(diào)節(jié)作用表現(xiàn)在對宿主免疫細(xì)胞活性的影響，如對巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞等均有一定作用。對巨噬細(xì)胞的作用：IFNγ可使巨噬細(xì)胞表面MHCⅡ類分子的表達(dá)增加，增強其抗原遞呈能力；此外還能增強巨噬細(xì)胞表面表達(dá)Fc受體，促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞
5、噬免疫復(fù)合物、抗體包被的病原體和腫瘤細(xì)胞。對淋巴細(xì)胞的作用：干擾素對淋巴細(xì)胞的作用較為復(fù)雜，可受劑量和時間等因素的影響而產(chǎn)生不同的效應(yīng)。在抗原致敏之前使用大劑量干擾素或?qū)⒏蓴_素與抗原同時投入會產(chǎn)生明顯的免疫抑制作用；而低劑量干擾素或在抗原致敏之后加入干擾素則能產(chǎn)生免疫增強的效果。在適宜的條件下，IFNγ對B細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的分化有促進(jìn)作用，但不能促進(jìn)其增殖。IFNγ能增強TH1細(xì)胞的活性，增強細(xì)胞免疫功能；但對TH2細(xì)胞的增殖有抑制作用，因此抑制體液免疫功能。IFNγ不僅抑制TH2細(xì)胞產(chǎn)生IL-4，而且抑制IL-4對B細(xì)胞的作用
6、，特別是抑制B細(xì)胞生成IgE。對其它細(xì)胞的作用：IFNγ對其他細(xì)胞也有廣泛影響：①刺激中性粒細(xì)胞，增強其吞噬能力；②活化NK細(xì)胞，增強其細(xì)胞毒作用；③使某些正常不表達(dá)MHCⅡ類分子的細(xì)胞（如血管內(nèi)皮細(xì)胞、某些上皮細(xì)胞和結(jié)締組織細(xì)胞）表達(dá)MHCⅡ類分子，發(fā)揮抗原遞呈作用；④使靜脈內(nèi)皮細(xì)胞對中性粒細(xì)胞的粘附能力更強，且可分化為高內(nèi)皮靜脈，吸引循環(huán)的淋巴細(xì)胞（增強免疫系統(tǒng)）。重組干擾素的臨床應(yīng)用廣譜抗病毒活性（rhuIFNα）慢性乙型、丙型、丁型肝炎；皰疹、病毒性角膜炎。直接抗腫瘤活性（rhuIFNα）毛細(xì)胞和慢性髓樣白血病、Kaposi
7、肉瘤、非霍奇金淋巴瘤。免疫調(diào)節(jié)活性——治療慢性肉芽腫瘤（rhuIFNγ）多發(fā)性硬化癥rhuIFNβ干擾素生產(chǎn)工藝路線（1）體外誘生干擾素制備工藝：Sendai病毒誘導(dǎo)人白細(xì)胞1989年：IFNα-n3，批準(zhǔn)上市產(chǎn)量低：1gIFNα，需要3億ml人血白細(xì)胞來源困難，工藝復(fù)雜，收率低，價格昂貴潛在的血源性病毒污染的可能性干擾素生產(chǎn)工藝路線（2）人源轉(zhuǎn)化細(xì)胞系培養(yǎng)生產(chǎn)工藝：1999年：IFNα-n1,批準(zhǔn)用于臨床。優(yōu)點：首次實現(xiàn)大規(guī)模商業(yè)化生產(chǎn)。缺點：活性低，退出臨床應(yīng)用。干擾素生產(chǎn)工藝路線（3）上市產(chǎn)品：rhuIFNβ-1a1996，A
8、vonex(Biogen)；2002，Rebif(Serono)表達(dá)產(chǎn)物：166aa糖基化蛋白，22.5ku工藝特點：分泌表達(dá)，產(chǎn)量低，成本高,過程嚴(yán)格動物無限細(xì)胞系培養(yǎng)生產(chǎn)工藝：干擾素生產(chǎn)工藝路線（4）上市產(chǎn)品：重組人干擾素rhuI
