激光掃描共聚焦顯微鏡使用說明

激光掃描共聚焦顯微鏡使用說明

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時(shí)間:2018-07-09

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1、激光掃描共聚焦顯微鏡使用說明標(biāo)簽:激光掃描共聚焦顯微鏡使用說明激光掃描共聚焦顯微鏡可以:(1)光切片掃描、3D圖像處理、時(shí)間序列拍攝成像;(2)細(xì)胞、綠熒光蛋白、生物熒光樣品觀察分析;(3)熒光原位雜交分析。詳細(xì)實(shí)驗(yàn)方法共聚焦顯微鏡激光掃描法實(shí)驗(yàn)方法原理激光共聚焦掃描顯微鏡(Confocallaserscanningmicroscope,CLSM)用激光作掃描光源,逐點(diǎn)、逐行、逐面快速掃描成像,掃描的激光與熒光收集共用一個(gè)物鏡,物鏡的焦點(diǎn)即掃描激光的聚焦點(diǎn),也是瞬時(shí)成像的物點(diǎn)。由于激光束的波長較短,光束很細(xì),所以共焦激光掃描顯微鏡有較高的分辨力,大約是普通光學(xué)顯微鏡的3倍。系統(tǒng)經(jīng)一次

2、調(diào)焦,掃描限制在樣品的一個(gè)平面內(nèi)。調(diào)焦深度不一樣時(shí),就可以獲得樣品不同深度層次的圖像,這些圖像信息都儲于計(jì)算機(jī)內(nèi),通過計(jì)算機(jī)分析和模擬,就能顯示細(xì)胞樣品的立體結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞試劑、試劑盒熒光染料水培養(yǎng)基儀器、耗材激光掃描共聚焦顯微鏡載玻片洗瓶滴管試管實(shí)驗(yàn)步驟一、觀察及儀器操作1.開啟儀器電源及光源一般先開啟顯微鏡和激光器,再啟動計(jì)算機(jī),然后啟動操作軟件,設(shè)置熒光樣品的激發(fā)光波長,選擇相應(yīng)的濾光鏡組塊。以便光電倍增管(photomultipliertube,PMT)檢測器能得到足夠的信號結(jié)果。使用汞燈的注意事項(xiàng)同普通熒光顯微鏡。2.設(shè)置相應(yīng)的掃描方式在目視模式下.調(diào)整所用物鏡放大倍數(shù)

3、,在熒光顯微鏡下找到需要檢測的細(xì)胞。切換到掃描模式,調(diào)整雙孔針和激光強(qiáng)度參數(shù),即可得到清晰的共聚焦圖像。3.獲取圖像選擇合適的圖像分辨率,將樣品完整掃描后,保存圖像結(jié)果即可。4.關(guān)閉儀器儀器測定樣品結(jié)束后,先關(guān)閉激光器部分,計(jì)算機(jī)仍可繼續(xù)進(jìn)行圖像和數(shù)據(jù)處理。若要退出整個(gè)激光掃描共聚焦顯微鏡系統(tǒng).則應(yīng)該在激光器關(guān)閉后,待其冷卻至少10分鐘后再關(guān)閉計(jì)算機(jī)及總開關(guān)。二、獲取三維圖像激光掃描共聚焦顯微鏡具有細(xì)胞“CT”功能,因此,它可以在不損傷細(xì)胞的情況下,獲得一系列光學(xué)切片圖像。選用“Z-Stack"模式,即可實(shí)現(xiàn)此項(xiàng)功能。1.開啟“Z-Stack”選項(xiàng)。2.確定光學(xué)切片的位置及層數(shù)。3.

4、啟動“Start”,獲得三維圖像。三、獲取時(shí)間序列圖像共聚焦顯微鏡的"Time-Series"功能,可以自動在實(shí)驗(yàn)者規(guī)定的時(shí)間內(nèi)按照設(shè)定的時(shí)間間隔獲取圖像。只需設(shè)定所需的時(shí)間間隔以及所需圖像數(shù)量,開啟“StartT”功能鍵,即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)?!癟ime-Series"功能大大減輕了實(shí)驗(yàn)者的勞動強(qiáng)度,對于熒光漂白恢復(fù)和鈣離子成像等實(shí)驗(yàn)非常實(shí)用。展開注意事項(xiàng)1.儀器周圍要遠(yuǎn)離電磁輻射源;2.環(huán)境無震動,無強(qiáng)烈的空氣擾動;3.室內(nèi)具有遮光系統(tǒng),保證熒光樣品不會被外源光漂白;4.環(huán)境清潔;5.控制工作溫度在5~25℃。

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