冰凍機(jī)采血小板的制備及應(yīng)用

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1、冰凍機(jī)采血小板的制備及應(yīng)用作者：孫轍胡運華黃錦趙予【關(guān)鍵詞】采血小板　　隨著輸血醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，臨床輸用血小板需求量日趨增加。而目前國內(nèi)外通用的血小板保存方法及供應(yīng)數(shù)量、供給及時性遠(yuǎn)不能滿足臨床需要。常規(guī)保存方法（22℃，5d）極大的限制了血小板的臨床應(yīng)用。深低溫保存可能是維持生物細(xì)胞、組織活性最理想的方法之一，也是許多研究人員目前致力的重要方向。宜昌市中心血站為滿足臨床危重病人的搶救需要，于2003年開展冰凍血小板的制備，筆者現(xiàn)對冰凍血小板的制備過程做一介紹和總結(jié)。　　1材料與方法　　1.1采集對象血小板計數(shù)>15

2、0×109/L，體檢合格，1周內(nèi)未服任何影響血小板功能的藥物，來自本市的自愿獻(xiàn)血者78名。均為男性，年齡20～48歲，平均34歲?！　?.2材料CS―3000PLUS血細(xì)胞分離機(jī)、4R2210單采管道、二甲基亞砜（10ml裝）、冰凍保護(hù)袋、塑料灌裝針、注射器。5　　1.3方法　　1.3.1采集方法選擇程序，分離夾為TNX-6，產(chǎn)品夾為A-35，采用16號針頭雙側(cè)肘正中靜脈連續(xù)流動式采血。采集后的血小板作外觀檢查，不可有血小板聚集和纖維蛋白析出?！　?.3.2冰凍方法在無菌室操作臺制備，單采血小板袋與專用冰凍保護(hù)袋相連，將血

3、小板壓入冰凍保護(hù)袋，連接塑料注入針，針尖部處于袋內(nèi)中央，用注射器抽取二甲基亞砜，以1ml/min的速度緩慢注入袋內(nèi)，邊注邊搖動冰凍保護(hù)袋，使之水平旋轉(zhuǎn)，防止注入過程中產(chǎn)熱。二甲基亞砜在產(chǎn)品中的終極濃度為5%。完畢后熱合封口立即放入-80℃冰箱。　　1.3.3解凍復(fù)融方法將冰凍的血小板取出后，置入42℃恒溫水浴箱中，輕輕搖動冰凍袋，以防損傷，直至融化。融化后放置時間不宜過長，應(yīng)立即輸注給病人?！　?.4檢測方法分別在機(jī)采血小板制備及加入保護(hù)劑后留樣，加入了保護(hù)劑的樣本與產(chǎn)品同時冰凍，以備復(fù)融后檢測。用瑞士產(chǎn)ABX-MICRO

4、S血細(xì)胞計數(shù)儀檢測?！　?.5計算公式5　　細(xì)胞含量=細(xì)胞計數(shù)×容量/1000　　血小板采集效率=產(chǎn)品的血小板計數(shù)×容量/（處理全血量-ACD用量）×供者的血小板計數(shù)　　2結(jié)果　　CS-3000PLUS血細(xì)胞分離機(jī)采集，血小板78例，采前每位供者都取手指血進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，見表1。解凍后樣本血小板計數(shù)，見表2?！　”?采前供者血細(xì)胞計數(shù)及機(jī)采血小板產(chǎn)品的細(xì)胞計數(shù)和含量（略）　　表2復(fù)融前后產(chǎn)品血小板計數(shù)（略）　　3討論5　　低溫保存血小板的目的簡單地說就是要保存新鮮血小板的生理功能，其凍存效果檢測也是緊緊圍繞這個中心進(jìn)行。二甲

5、基亞砜是細(xì)胞內(nèi)深低溫保護(hù)劑，分子量小，易透過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，起到對細(xì)胞膜的保護(hù)作用。對血小板保存效果好，對人體沒有副作用及制作方便，輸入時不用洗滌。有一定的抑菌和抗血小板凝集作用可明顯防止微循環(huán)堵塞。低溫保存血小板與新鮮血小板相比功能恢復(fù)情況，國內(nèi)外文獻(xiàn)報道不一。Towell等認(rèn)為在凍存與解凍過程中，一般有15%～40%的血小板會損失掉。在做了大量比較工作后他得出了新鮮血小板輸注后在1～24h測得的CCI值高于輸注低溫保存血小板。重慶、長春等血站的試驗結(jié)果:-80℃冰凍保存1周血小板回收率為88.53%，1個月回收率為8

6、7.39%基本相同。我站為（72±6）%。多數(shù)研究認(rèn)為低溫凍存后，血小板體內(nèi)存活率減少40%～50%。而Barnard等則報道與新鮮血小板、保存液體血小板相比，冰凍血小板的膜表面粘附受體的結(jié)合能力明顯增強(qiáng)，促凝血活性明顯提高，我國學(xué)者劉景漢等認(rèn)為輸入低溫保存血小板后雖然血小板計數(shù)增加不明顯，不如新鮮血小板，但出血癥狀改善明顯，止血效果明顯優(yōu)于液體保存血小板，并在大量臨床應(yīng)用中得到了滿意的效果?！　≡诓僮髦袘?yīng)均勻、緩慢地加入二甲基亞砜，并同時輕柔順時晃動冰凍袋中的血小板，加入速度為1ml/min，混合好的血小板應(yīng)迅速置入-8

7、0℃低溫冰箱保存，復(fù)溫溫度37℃～42℃，快速復(fù)溫應(yīng)在2～3min內(nèi)完成等等，已基本上得到認(rèn)可與共識。在復(fù)溫溶解后，二甲基亞砜洗滌的問題上，許多學(xué)者認(rèn)為應(yīng)采用4500r離心5min22℃5，去除二甲基亞砜并使用其自身血漿重懸后輸注;而我國有學(xué)者則認(rèn)為二甲基亞砜無需洗滌，冰凍保存血小板復(fù)溫后可直接輸注。他們認(rèn)為二甲基亞砜無明顯毒副作用，可靜脈輸注;不洗滌可防止處理過程中對血小板帶來的進(jìn)一步損害，以及洗滌過程中可能帶入污染的細(xì)菌因素。在制備過程中，高質(zhì)量的濃縮血小板是整個過程的基礎(chǔ)，加入二甲基亞砜的過程是關(guān)鍵，融化過程是否成功

8、是結(jié)果，三個過程不可忽視任何一環(huán)，只有這樣，才能使制品成功地應(yīng)用于臨床。5