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1、學(xué)校代碼10459學(xué)號或申請?zhí)?01512524293密級公開碩士學(xué)位論文γc家族細(xì)胞因子對體外培養(yǎng)T細(xì)胞表型的影響作者姓名：趙靜靜導(dǎo)師姓名：韓雙印學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱：內(nèi)科學(xué)培養(yǎng)院系：鄭州大學(xué)人民醫(yī)院完成時間：2018年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterInfluenceofγ-chain(γc)familycytokineonphenotypeofTcellsculturedinvitroByJingjingZhaoSupervisor:Prof.Shuangyi
2、nHanInteralMedicinePeople'sHospitalofZhengzhouUniversityMay2018學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者：日期：年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同
3、意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者：日期：年月日γc家族細(xì)胞因子對體外培養(yǎng)T細(xì)胞表型的影響研究生：趙靜靜導(dǎo)師：韓雙印鄭州大學(xué)人民醫(yī)院消化科鄭州450003摘要目的過繼免疫治療是近年來越來越令人矚目和鼓舞人心的癌癥治療方法，其中嵌合抗原受體T細(xì)胞
4、（chimericantigenreceptorengineeredTcells,CAR-T）已成為治療血液腫瘤的利劍，理想的效應(yīng)細(xì)胞殺傷性強、持久性高、抗腫瘤效果佳，可作為穩(wěn)定的記憶細(xì)胞存在于患者體內(nèi)以預(yù)防癌癥復(fù)發(fā)。因此制備高效能的T細(xì)胞是以嵌合抗原受體為基礎(chǔ)的腫瘤過繼免疫治療成功的關(guān)鍵。研究表明，CAR-T的治療效果與T細(xì)胞的分離、激活與擴(kuò)增及T細(xì)胞表型密切相關(guān)。本研究通過探討從外周血單個核細(xì)胞（peripheralbloodmononuclearcells，PBMC）分選T細(xì)胞的最佳方法及γc家族細(xì)胞因子對體外培養(yǎng)T細(xì)胞表型的影響，為腫瘤的過繼免
5、疫治療提供實驗依據(jù)。方法1.抽取5名體健志愿者外周血40ml于肝素抗凝管中，F(xiàn)icoll密度梯度法提取外周血單個核細(xì)胞，計數(shù)。2.采用尼龍毛柱法、CD3磁珠陽性分選法、CD3磁珠陰性分選法和自然沉降法從PBMC中分選T細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)比較四種方法的純度和細(xì)胞活性、細(xì)胞計數(shù)計算回收率。3.CD3/CD28磁珠激活細(xì)胞，將γc家族細(xì)胞因子分為IL-2組和混合組（IL-7、IL-15、IL-21），在含有IL-2和混合細(xì)胞因子的AIMV培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)CD3+T，定期計數(shù)比較擴(kuò)增倍數(shù)差異，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表型差異。4.收集培養(yǎng)所得T細(xì)胞，CFDASE染色，
6、流式細(xì)胞儀檢測IL-2與IL-7、IL-15、IL-21對細(xì)胞增殖的影響。I結(jié)果1.尼龍毛柱法、CD3磁珠陽性分選法、CD3磁珠陰性分選法和自然沉降法四種方法分選所得T細(xì)胞純度依次為：（86.74±1.06）%、（89.61±1.40）%、（94.06±1.07）%、（88.48±1.86）%。細(xì)胞活性依次為：（97.21±0.82）%、（97.99±1.11）%、（97.25±1.07）%、（98.61±1.10）%?；厥章室来螢椋海?5.03±2.79）%、（20.15±3.41）%、（42.98±2.82）%、（60.29±1.53）%。2.IL
7、-2組與混合組T細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)為（262.6±143.2）vs（73.0±25.8）。IL-2組與混合組的早期記憶T細(xì)胞、Tscm+Tscm-like、Tcm占總T細(xì)胞的比例為（39.6±1.52）%vs（55.6±1.82）%，（9.8±1.30）%vs（16.6±1.82）%，（29.8±1.79）%vs（39.0±1.58）%。3.IL-2組與混合組對T細(xì)胞增殖的影響：培養(yǎng)至第10天，在IL-2作用下，T細(xì)胞增殖大多增殖到8、9代，而在混合細(xì)胞因子作用下T細(xì)胞多增殖至第6、7代，IL-2組與混合組的增殖指數(shù)（theProliferationinde
8、xofTcells，PI）為48.2和22.54.結(jié)論1.綜合比較四種方法的成本、耗時、T細(xì)胞
