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《雌黃(三硫化二砷)誘導(dǎo)hl》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、雌黃(三硫化二砷)誘導(dǎo)HL【關(guān)鍵詞】雌黃(三硫化二砷)；HL-60細(xì)胞；凋亡ExperimentalstudyonAs2S3(Orpiment)inducedapoptosisandnecrosisofhumanleukemiacelllineHL-60【Abstract】ObjectiveThecurrentstudyent)anacutemyloidleukemiacelllineHL-60.MethodsAcuteleukemiacelllineHL-60odel.HL-60celllineorphology
2、（includingmicroscopeandelectronmicroscope）andfloetry，thelattercandistinguishlivecell，apoptoticcellandnecroticcellthroughdoublestainingofAnnexinVandpropidiumiodide，ofeasuredonfloetry.Results2.5μmol/LofAs2S3couldinducemostofcellHL-60necrosisandasmallpartofcellap
3、optosisol/LAs2S3couldinduceapoptosisofhumanleukemiacelllineHL-60yloidleukemia.SinceitcaninduceapoptosisandnecrosisofHL-60cell.【Keyent)；HL-60cell；Apoptosis近年來對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血?。ˋPL）的治療方面的有關(guān)研究取得了重大進(jìn)展，全反式維甲酸、三氧化二砷以及復(fù)方青黛片（主要成分為As4S4）對(duì)APL治療均有較高完全緩解率，尤其后兩者對(duì)APL治療作用，主要是通過凋亡來
4、實(shí)現(xiàn)的［1］，因此誘發(fā)細(xì)胞凋亡已成為白血病治療的新思路。本研究旨在進(jìn)一步探索中藥雌黃(又稱黃砷，主要成分為As2S3)在體外對(duì)急性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞株HL-60的凋亡與壞死作用。1材料與方法1.1制劑As2S3（上?；瘜W(xué)試劑公司）配成500μmol/L的儲(chǔ)存液，過濾滅菌，4℃存放備用，臨用前稀釋成所需濃度。1.2細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞生長(zhǎng)狀況測(cè)定HL-60細(xì)胞（由江蘇省血液研究所陳子興教授惠贈(zèng)）細(xì)胞以2×105/ml接種于RPMI1640培養(yǎng)液（10%胎牛血清，100U/ml青霉素和100mg/ml鏈霉素）中培養(yǎng)（37℃、
5、5%CO2）。加藥后逐日取藥物處理組與對(duì)照組細(xì)胞臺(tái)盼藍(lán)染色，光鏡下計(jì)數(shù)活細(xì)胞總數(shù)連續(xù)6天，繪制生長(zhǎng)曲線。1.2.1細(xì)胞形態(tài)觀察及流式細(xì)胞儀測(cè)定培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)3.0μmol/LAs2S3孵育一定時(shí)間后收集2×106細(xì)胞PBS洗2遍，1500r/min離心5min，棄上清，4℃2%戊二醛固定72h后，1%鋨酸固定，梯度脫水，EPON-812包埋，超薄切片，鈾和鉛雙重染色后透射電鏡下觀察。Annexin-V標(biāo)記按Immuno-tech公司的說明書進(jìn)行，1×106細(xì)胞用冰PBS洗2次，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/ml，加5μlA
6、nnexinV（1：10稀釋）和5μl碘化丙錠（PI）（250μg/ml）于490μl細(xì)胞懸液中，放置冰浴10min，用流式細(xì)胞儀(型號(hào)COULTEREPICS-XL)分析細(xì)胞凋亡情況。1.2.2殺傷力檢測(cè)以MTT（四甲偶氮唑藍(lán)）比色法檢測(cè)As2S3對(duì)HL-60細(xì)胞的殺傷率。將生長(zhǎng)良好的HL-60細(xì)胞以2×105/ml濃度加入96孔培養(yǎng)板，每孔100μl，加入不同濃度的As2S3，每一濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，并設(shè)對(duì)照孔，置37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)48h，加入MTT（5mg/ml）10μl/孔，繼續(xù)孵育2h后，再加入DM
7、SO 100μl/孔，打勻后酶標(biāo)儀（型號(hào)MicroReaderTM4Plus）570nm處讀吸光度A值。并利用對(duì)數(shù)幾率圖解法測(cè)定藥物的半數(shù)抑制濃度（IC50）。2結(jié)果2.1As2S3對(duì)HL-60細(xì)胞增壯的抑制作用經(jīng)0.5μmol/LAs2S3處理的HL-60細(xì)胞生長(zhǎng)受到輕微抑制，經(jīng)1μmol/L、2μmol/LAs2S3處理的HL-60細(xì)胞生長(zhǎng)受到明顯抑制（見圖1），As2S3處理48h，對(duì)HL-60細(xì)胞的IC50為1.23μmol/L。2.2形態(tài)學(xué)變化HL-60細(xì)胞經(jīng)As2S3處理后，在透射電鏡下可見典型的凋亡形
8、態(tài)學(xué)特征：細(xì)胞固縮，胞漿濃縮，染色質(zhì)聚集，核碎裂，有的形成凋亡小體（見圖２），亦可見到壞死細(xì)胞(見圖3)。在倒置顯微鏡下可見凋亡細(xì)胞體積縮小，胞膜完整，細(xì)胞折光度明顯加深，壞死細(xì)胞膜破裂，活細(xì)胞則細(xì)胞透亮、折光度好。圖1As2S3對(duì)HL-60細(xì)胞的增殖抑制作用圖2HL-60凋亡細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)(×8000)圖3HL-60壞死細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)(×8000)2.3流式細(xì)
