酶聯(lián)法檢測(cè)hbv抗-hbc假陽(yáng)性分析

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1、酶聯(lián)法檢測(cè)HBV抗-HBc假陽(yáng)性分析孫桂利（牡丹江心血管病醫(yī)院檢驗(yàn)科157000）【摘要】目的：鑒別并糾正酶聯(lián)免疫吸附法（EUSA）檢測(cè)乙型肝炎抗-HBc過(guò)程中出現(xiàn)的假陽(yáng)性結(jié)果。方法:在乙型肝炎“兩對(duì)半”臨床檢測(cè)標(biāo)木中隨即挑選抗-HBc陽(yáng)性的標(biāo)木620份,分別用科華公司和榮盛公司的試劑（均為ELISA法）復(fù)查抗-HBc。結(jié)果:在620份標(biāo)木中用科華公司的試劑檢測(cè)到抗-HBc陽(yáng)性標(biāo)木482份，用榮盛公司的試劑檢測(cè)到抗-HBc陽(yáng)性標(biāo)木498份，二者符合率為94.8%。其中114份標(biāo)木用兩種試劑復(fù)查后抗-HBc均為陰性。結(jié)論:用EUSA競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)抗-HB

2、c,由于非特異吸附和操作等原因易山現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，尤其對(duì)于抗-HBs和抗-HBc同時(shí)陽(yáng)性的標(biāo)木應(yīng)該復(fù)查抗-HBc?！娟P(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)抗-HBc乙型肝炎假陽(yáng)性【中圖分類號(hào)】R446.61【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1672-5085（2014）08-0162-02我國(guó)是乙型肝炎病毒（HepatitisBvirus,HBV）感染高發(fā)IX,據(jù)佔(zhàn)?計(jì)約1.2億人攜帶HBV病毒［1］。HBV感染人體后血清會(huì)山現(xiàn)乙型肝炎病毒表面抗原陽(yáng)性，患者血清中一般會(huì)同時(shí)出現(xiàn)乙型肝炎病毒核心抗體（抗-HBc）陽(yáng)性。若患者從HBV感染狀態(tài)中恢復(fù)，一些患者血清中抗-HBc

3、將伴隨HBsAg消失；另一些患者則HBsAg消失，但核心抗體仍保持陽(yáng)性，但血清中會(huì)同時(shí)出現(xiàn)乙型肝炎病毒表面抗體陽(yáng)性或（和）乙型肝炎病毒e抗體陽(yáng)性。但臨床上少數(shù)患者在檢測(cè)HBV標(biāo)志物時(shí)往往會(huì)出現(xiàn)血清單項(xiàng)抗-HBc陽(yáng)性，目前對(duì)血清單項(xiàng)抗-HBc陽(yáng)性的臨床意義仍不完全清楚。筆者對(duì)2010年5月至2012年9月間620份抗-HBc陽(yáng)性的標(biāo)木進(jìn)行了復(fù)查，現(xiàn)報(bào)告如下。1材料與方法1.1臨床資料我院2010年5月至2012年9月間門(mén)診及住院患者620份抗-HBc陽(yáng)性的標(biāo)本。1.2試劑HBs-Ag、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc常規(guī)批量檢測(cè)試劑盒均

4、購(gòu)自科華生物技術(shù)有限公司。HBs-Ag、抗-HBs、HBeAg檢測(cè)試劑盒為“夾心法”，抗-HBe和抗-HBc檢測(cè)試劑盒為“競(jìng)爭(zhēng)法”?？?HBc復(fù)查試劑盒分別購(gòu)于科華生物技術(shù)有限公司和上海榮盛生物技術(shù)有限公司，為“競(jìng)爭(zhēng)法”。1.3方法常規(guī)檢測(cè)：采集靜脈血，在標(biāo)本凝固后離心(3000g,5min)，乙肝“兩對(duì)半”五項(xiàng)指標(biāo)同吋批量檢測(cè)，HBs-Ag、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc五塊板條冋時(shí)加入待檢血清，標(biāo)本全部加入約需30min，然后再加入酶標(biāo)記的相應(yīng)抗體，即酶標(biāo)抗體的加入滯后于血清標(biāo)本約30min。其余步驟嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作?？?HBc

5、復(fù)查實(shí)驗(yàn)：每次“兩對(duì)半”常規(guī)檢測(cè)后，挑選抗-HBc陽(yáng)性的標(biāo)本，高速離心(5000g,10min),然后分別用科華生物技術(shù)冇限公司和上海榮盛生物技術(shù)冇限公司的試劑盒復(fù)查抗-HBc,嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作。基本保證血清與酶結(jié)合物同吋加入。1結(jié)果620份標(biāo)本分別用兩種方法復(fù)查抗-HBc的結(jié)果.在620份標(biāo)本中用科華公司的試劑檢測(cè)到陽(yáng)性標(biāo)本482份，用榮盛公司的試劑檢測(cè)到陽(yáng)性標(biāo)本498份，二者符合率為94.8%。其中114份標(biāo)本用兩種試劑復(fù)查后均為陰性，占18.4%。尤其是“兩對(duì)半”結(jié)果為HBsAg(-)、抗-HBs(+)、HBeAg(-)、抗-Hbe(+或-)

6、、抗-HBc(+)模式的標(biāo)本，抗-HBc假陽(yáng)性率高達(dá)51.0%。2討論HBV病毒于1998年被國(guó)際病毒命名委員會(huì)正式劃歸到新的肝DNA病毒科,屬正嗜肝病毒屬，它是乙型病毒性肝炎的病原體。在我國(guó)一般人群中HBsAg陽(yáng)性率為9.1%。HBV基因組是不完全閉合環(huán)狀雙鏈DNA,長(zhǎng)鏈為負(fù)鏈，約含3200bp,完全閉合。短鏈長(zhǎng)度可變，呈半環(huán)狀［2】?？?HBc并非保護(hù)性抗體，它可隨HBV病毒慢性感染而長(zhǎng)期存在。對(duì)一些感染過(guò)HBV而恢復(fù)的個(gè)體，其血液中抗-HBc會(huì)存在數(shù)年，并往往伴隨抗-HBs陽(yáng)性或（和）抗-HBe陽(yáng)性。在臨床上少數(shù)個(gè)體在檢測(cè)HBV標(biāo)志物時(shí)往往會(huì)

7、出現(xiàn)血清單項(xiàng)抗-HBc陽(yáng)性，一些學(xué)者認(rèn)為血清單項(xiàng)抗-HBc陽(yáng)性是個(gè)體既往感炎HBV卻未能產(chǎn)生抗-HBs所致，近來(lái)研究表明血清單項(xiàng)抗-HBc陽(yáng)性是HBV隱性感染的一?種表現(xiàn)。酶聯(lián)免疫吸附競(jìng)爭(zhēng)一步法是檢測(cè)血清抗-HBc最常用的方法，操作簡(jiǎn)便，反應(yīng)時(shí)間短。其反應(yīng)原理是加入待測(cè)標(biāo)本中的抗-HBc和HRP標(biāo)記的抗HBc競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合微孔板上固相抗原，通過(guò)底物顯色。在臨床檢驗(yàn)過(guò)程中，標(biāo)本檢測(cè)通常是成批的，醫(yī)院每天檢測(cè)乙肝五項(xiàng)患者都在百人以上，因此在實(shí)際操作中加入第一個(gè)標(biāo)本和加入最后一個(gè)標(biāo)本，即使是熟練的檢驗(yàn)人員，加樣吋間相隔一般也在20min以上，另外加入試劑及混勻

8、等都冋樣存在吋間差異，這都會(huì)造成假陽(yáng)性結(jié)果。國(guó)內(nèi)各廠家試劑盒靈敏度不同，檢出陽(yáng)性率也不盡相冋，可能導(dǎo)致了臨界值標(biāo)本產(chǎn)生陽(yáng)性