資源描述：
《ampk在氯離子介導(dǎo)心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷中的作用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、南昌大學(xué)碩士學(xué)位論文AMPK在氯離子介導(dǎo)心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷中的作用姓名：孫惦申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：何明201206摘要舢舢Ⅷ咖洲ⅢⅢⅧ洲刪Y2157835目的：在調(diào)節(jié)心肌能量代謝過程中，AMPKa2起著非常重要的作用。本實驗擬建立H9c2細(xì)胞缺氧／復(fù)氧(A瓜)及去除細(xì)胞外Cl‘的刖R(C1一．舶e刖R)損傷模型，探討AMPK0【2低表達(dá)在氯離子介導(dǎo)心肌細(xì)胞A瓜損傷中的作用，以便進(jìn)一步研究心肌AR損傷機制。方法：運用RNA干擾技術(shù)，以pSuper．Re仃。為載體，構(gòu)建AMPK0【2sⅪ斟A重組質(zhì)粒。通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)導(dǎo)，建立AMPK0【2正常表達(dá)和低表達(dá)的心肌細(xì)胞(H
2、9c2)，westemBlot法測定AMPKa2的蛋白表達(dá)情況。實驗分五組，每組重復(fù)6次：(1)正常對照組；(2)刖R組；(3)去除細(xì)胞外Cl’的A瓜組(Cl。一ne～R)；(4)pSuper+C1’一舶e～R組；(5)pS．AMPKOL2+Cl’一行eeA瓜。四唑鹽(MTT)法測定各組心肌細(xì)胞存活率；測定各組抗氧化物酶SOD、乳酸脫氫酶LDH、谷胱甘肽過氧化物酶GSH．Px的活性；流式細(xì)胞儀測定各組ROS水平、線粒體膜電位、細(xì)胞凋亡程度。結(jié)果；1．經(jīng)過酶切鑒定及基因測序結(jié)果證實：AMP‰2sI州A干擾質(zhì)粒重組成功；2．WestemBlot檢測表明：重組質(zhì)粒能有效下調(diào)H9c2中A
3、MPKQ2蛋白表達(dá)；3．正常H9c2細(xì)胞經(jīng)AR處理后損傷嚴(yán)重，去除細(xì)胞外Cl一的刖R組有明顯對抗A瓜導(dǎo)致的細(xì)胞存活率、SOD、GSH．PX酶活性下降，對細(xì)胞起保護(hù)作用；而AMPK低表達(dá)組中Cl一．疳ee對細(xì)胞的保護(hù)作用明顯消失，細(xì)胞存活率、SOD、GSH．PX酶活性、線粒體膜電位下降，細(xì)胞內(nèi)ROS含量、LDH活性升高，細(xì)胞凋亡程度明顯比Cl‘．丘eeAR組嚴(yán)重(P<0．01)。pSuper+Cl’．行eeA瓜組與Cl’．丹eeA瓜組相比，各指標(biāo)無明顯差異(P>0．05)。結(jié)論：AMPKa2參與了去除細(xì)胞外氯離子(Cl。一舶e)對抗心肌急性缺氧／復(fù)氧損傷的作用，AMPKQ2基因沉默
4、使C1’．行ee在心肌細(xì)胞缺氧／復(fù)氧中的保護(hù)作用消失。關(guān)鍵詞：AMPKOL2，氯離子，缺氧／復(fù)氧，RNA干擾國家自然科學(xué)基金資助項目(NO：30860271)Abs仃actABSTRACTobjective：AMPKa2playsaVeryene喑ymetabolism．Weestablishedt11eimportantroleinregulatingmyocardialanoxi“reoxygenationirljurymodelandC1一．行eeA／Rinjurymodelt11atC1．inpermsionsolutionwasr印laced謝thequimolar西u
5、conate-duringtheA／RprotocolofH9c2myocytestoexploremeroleofAMPKa2lowexpressioninacuteA瓜iIlju巧mediatedbyCl。．AndinordertomrcllersnldytllemechallismofA／】Rinjury．Methods：ThepSuper．RetroplaSmidconsideredasVectorwasusedtocons饑lcttheAMPKOL2shRNArecombinantplaSmidbyRNAinterferencetecⅢque．Weesta_blishe
6、dmenomlalexpressionaIldlowexpressionlevelsofAMPK0【2proteininH9c2cellsbygene仃a11sfectiontechIlique．TheexpressionofAMPK0【2wausaSsayedbyWeStemB10taIlmyses．nleH9c2cellswereraJldomlydiVidedintofiVegroups：(1)Con仃olgroup；(2)A瓜group；(3)remoValofex仃acellularCl‘+A瓜group(Cl。-舶eA瓜group)；(4)pSuper+C1‘一舶eA
7、瓜伊oup；(5)pS-AMPKOL2+Cl一-丘eeA瓜伊oup．Everygroupr印eatssixtimes．ThenCellViabili鑼wasaSsayedbyMTT，aIldSOD，LDH．GSH．PxactivitvinH9c2weredetected．’I’llelevelofintracellularROS，thepercemageof印optosisa11dt11emitochondriamembranepotential、veremeasuredbyno
