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《ampk在氯離子介導心肌細胞缺氧復氧損傷中的作用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、南昌大學碩士學位論文AMPK在氯離子介導心肌細胞缺氧/復氧損傷中的作用姓名：孫惦申請學位級別：碩士專業(yè)：藥理學指導教師：何明201206摘要舢舢Ⅷ咖洲ⅢⅢⅧ洲刪Y2157835目的：在調節(jié)心肌能量代謝過程中，AMPKa2起著非常重要的作用。本實驗擬建立H9c2細胞缺氧／復氧(A瓜)及去除細胞外Cl‘的刖R(C1一．舶e刖R)損傷模型，探討AMPK0【2低表達在氯離子介導心肌細胞A瓜損傷中的作用，以便進一步研究心肌AR損傷機制。方法：運用RNA干擾技術，以pSuper．Re仃。為載體，構建AMPK0【2sⅪ斟A重組質粒。通過質粒轉導，建立AMPK0【2正常表達和低表達的心肌細胞(H
2、9c2)，westemBlot法測定AMPKa2的蛋白表達情況。實驗分五組，每組重復6次：(1)正常對照組；(2)刖R組；(3)去除細胞外Cl’的A瓜組(Cl。一ne～R)；(4)pSuper+C1’一舶e～R組；(5)pS．AMPKOL2+Cl’一行eeA瓜。四唑鹽(MTT)法測定各組心肌細胞存活率；測定各組抗氧化物酶SOD、乳酸脫氫酶LDH、谷胱甘肽過氧化物酶GSH．Px的活性；流式細胞儀測定各組ROS水平、線粒體膜電位、細胞凋亡程度。結果；1．經過酶切鑒定及基因測序結果證實：AMP‰2sI州A干擾質粒重組成功；2．WestemBlot檢測表明：重組質粒能有效下調H9c2中A
3、MPKQ2蛋白表達；3．正常H9c2細胞經AR處理后損傷嚴重，去除細胞外Cl一的刖R組有明顯對抗A瓜導致的細胞存活率、SOD、GSH．PX酶活性下降，對細胞起保護作用；而AMPK低表達組中Cl一．疳ee對細胞的保護作用明顯消失，細胞存活率、SOD、GSH．PX酶活性、線粒體膜電位下降，細胞內ROS含量、LDH活性升高，細胞凋亡程度明顯比Cl‘．丘eeAR組嚴重(P<0．01)。pSuper+Cl’．行eeA瓜組與Cl’．丹eeA瓜組相比，各指標無明顯差異(P>0．05)。結論：AMPKa2參與了去除細胞外氯離子(Cl。一舶e)對抗心肌急性缺氧／復氧損傷的作用，AMPKQ2基因沉默
4、使C1’．行ee在心肌細胞缺氧／復氧中的保護作用消失。關鍵詞：AMPKOL2，氯離子，缺氧／復氧，RNA干擾國家自然科學基金資助項目(NO：30860271)Abs仃actABSTRACTobjective：AMPKa2playsaVeryene喑ymetabolism．Weestablishedt11eimportantroleinregulatingmyocardialanoxi“reoxygenationirljurymodelandC1一．行eeA／Rinjurymodelt11atC1．inpermsionsolutionwasr印laced謝thequimolar西u
5、conate-duringtheA／RprotocolofH9c2myocytestoexploremeroleofAMPKa2lowexpressioninacuteA瓜iIlju巧mediatedbyCl。．AndinordertomrcllersnldytllemechallismofA／】Rinjury．Methods：ThepSuper．RetroplaSmidconsideredasVectorwasusedtocons饑lcttheAMPKOL2shRNArecombinantplaSmidbyRNAinterferencetecⅢque．Weesta_blishe
6、dmenomlalexpressionaIldlowexpressionlevelsofAMPK0【2proteininH9c2cellsbygene仃a11sfectiontechIlique．TheexpressionofAMPK0【2wausaSsayedbyWeStemB10taIlmyses．nleH9c2cellswereraJldomlydiVidedintofiVegroups：(1)Con仃olgroup；(2)A瓜group；(3)remoValofex仃acellularCl‘+A瓜group(Cl。-舶eA瓜group)；(4)pSuper+C1‘一舶eA
7、瓜伊oup；(5)pS-AMPKOL2+Cl一-丘eeA瓜伊oup．Everygroupr印eatssixtimes．ThenCellViabili鑼wasaSsayedbyMTT，aIldSOD，LDH．GSH．PxactivitvinH9c2weredetected．’I’llelevelofintracellularROS，thepercemageof印optosisa11dt11emitochondriamembranepotential、veremeasuredbyno
