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《梭子蟹過敏原分析及原肌球蛋白關(guān)鍵抗原表位重組表達》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號：R446．61密級：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位團專業(yè)學(xué)位口③學(xué)校代碼：1062學(xué)號：2010602781學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)天蚌醬科鼻垮TlANJINM￡DICAl-U鞫IVEf毫SI-I廣y碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目：梭子蟹過敏原分析及原肌球蛋白關(guān)鍵抗原表位重組表達TITLE-TheswimmingcraballergensAnalysisandtrOpOmVOSlnKeye01tooerecomt)mantexoresslon^-^工上(市中小企業(yè)創(chuàng)新基金和市衛(wèi)生局科技基金資助項目)一級
2、學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：臨床檢驗診斷學(xué)論文作者：李嬋指導(dǎo)教師：李會強教授導(dǎo)師組成員：李遁昶副教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年五月學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨立進行研究工作取得的研究成果。除了文中特別加以標注引用的內(nèi)容和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均己在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：盞日期：B年蛔‘日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解天津醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文
3、的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學(xué)校向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文，并編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫。保密口，在——年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密團。(請在相對應(yīng)的方框內(nèi)打“√”)學(xué)位論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：期：”年捐‘日期：乃年蛔6日天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目的：中文摘要食物過敏是當(dāng)今重大的衛(wèi)生學(xué)問題，食物過敏原的鑒定、純化并制備標準化的過敏原，是食物過敏性疾病診斷和治療的中心環(huán)節(jié)。本研究的目的是分別從分析過敏原和分析待檢IgE
4、多態(tài)性兩方面入手，力爭解決當(dāng)前血清特異性IgE檢測所存在的問題。首先，以梭子蟹為研究對象，過敏患者血清中的特異性抗體IgE為“探針”，對梭子蟹中的主要過敏原組分進行分析；其次，以蟹過敏患者為研究對象，分析蟹過敏患者血清特異性IgE所針對過敏原的異質(zhì)性。此外，選擇甲殼類動物共同的過敏原．原肌球蛋白中的一段含有3個抗原表位的多肽，為重組表達對象，重組表達此段多肽，采用原核生物(大腸桿菌)作為表達系．統(tǒng)，制備原肌球蛋白肽段的多肽片段，為今后進行不同過敏原關(guān)鍵表位的串聯(lián)體表達提供實驗基礎(chǔ)。方法：1．梭子蟹過敏原組分的分析：通過
5、去脂、抽提梭子蟹的總蛋白，SDS．PAGE分析蛋白組分，以蟹過敏患者血清中的特異性lee作為“探針”，經(jīng)western-blot技術(shù)，分析梭子蟹中的主要與特異性IgE結(jié)合的組分。2．蟹過敏患者特異性IgE所針對的過敏原異質(zhì)性分析：選取50例蟹過敏患者血清，經(jīng)western．blot技術(shù)分析不同的患者血清中的特異性IgE抗體多態(tài)性，即分析蟹過敏患者血清特異性IgE所針對的過敏原個體間存在的異質(zhì)性。3．原肌球蛋白中TM32a的重組表達及免疫活性鑒定：選擇原肌球蛋白中的一段含有3個抗原表位的多肽(簡稱為刪32a)。合成TM3
6、2a的DNA序列，選擇pET42a為載體，EcoRI和XhoI雙酶切構(gòu)建質(zhì)粒載體，克隆宿主菌Topl0擴增重組質(zhì)粒，利用最常見的原核表達宿主菌大腸桿菌BL21(DE)，以IPTG誘導(dǎo)蛋白表達，并利用載體上的所攜帶的His標簽蛋白，用鎳離子純化柱純化出單一組分的TM32a蛋白，免疫印跡法鑒定該目的蛋白的免疫活性。天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)果：1．梭子蟹過敏原組分的分析：梭子蟹的總蛋白粗提液中共觀察到9條主要蛋白條帶。在以陽性混合血清為探針的印跡中，94kD、74kD、70kD、48kD、43kD、40kD和36kD處均出
7、現(xiàn)了陽性反應(yīng)條帶，但蛋白濃度較高的74kD和70kD的蛋白與混合血清反應(yīng)并不是最強的，相反，蛋白含量中等的94kD的蛋白與混合血清反應(yīng)最強。2．蟹過敏患者血清特異性IgE所針對的過敏原的異質(zhì)性分析：以單例蟹患者血清為研究對象的westem．blot實驗中，發(fā)現(xiàn)不同的患者血清中的特異性IgE存在明顯的異質(zhì)性，即不同人的反應(yīng)蛋白數(shù)量和種類都有所不同，其中：①1種蛋白為主要過敏原；②兩種以上蛋白均為主要過敏原；③沒有強反應(yīng)的主要過敏原，而僅有幾種較輕反應(yīng)的過敏原。統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，其中以36kD的蛋白反應(yīng)率最高，可達80％。3．原肌
8、球蛋白中TM32a的重組表達及免疫活性鑒定：合成的原肌球蛋白中的TM32a的DNA序列大小為96bp左右，與pET-42a連接構(gòu)建質(zhì)粒載體，大小為6030bp左右，將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE)，IPTG誘導(dǎo)表達后，獲得大小為34kD左右的重組蛋白TM32a，將重組蛋白經(jīng)鎳離子柱純化柱純化后，獲得單一組分的34kD大小
