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《激光掃描共聚焦顯微鏡_圖文講解》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、激光掃描共聚焦顯微鏡吳旭2008.10.14高級顯微鏡原理正置、倒置顯微鏡細(xì)胞遺傳工作站活細(xì)胞工作站激光顯微分離系統(tǒng)激光共聚焦顯微鏡概述激光掃描共聚焦顯微鏡（Laserscanningconfocalmicroscope，LSCM）生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的主要應(yīng)用通過一種或者多種熒光探針標(biāo)記后，可對固定的組織或活體樣本進(jìn)行亞細(xì)胞水平結(jié)構(gòu)功能研究高空間分辨率、非介入無損傷連續(xù)光學(xué)切片、三維圖像、實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)等細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的分析檢測……ConventionalfluorescencemicroscopeConfocalmicroscope
2、歷史1957年，MarvinMinsky提出了共聚焦顯微鏡技術(shù)的某些基本原理，獲得了美國的專利。1967年，Egger和Petran成功地應(yīng)用共聚焦顯微鏡產(chǎn)生了一個(gè)光學(xué)橫斷面。1977年，Sheppard和Wilson首次描述了光與被照明物體的原子之間的非線性關(guān)系和激光掃描器的拉曼光譜學(xué)。1984年，Biorad為公司推出了世界第一臺商品化的共聚焦顯微鏡，型號為SOM-100，掃描方式為臺階式掃描。1986年MRC-500型改進(jìn)為光束掃描，用作生物熒光顯微鏡的共聚焦系統(tǒng)。Confocalmicroscopycomesofa
3、geJGWhite&WBAmos.Nature328,183-184(09July1987Zeiss、Leica、Meridian、OlympusZeissLSM510激光掃描共聚焦顯微鏡ZeissLSM510META激光掃描共聚焦顯微鏡ZeissLSM510META激光掃描共聚焦顯微鏡NikonA1R激光掃描共聚焦顯微鏡PrairieUltimaIV活體雙光子顯微鏡國家光電實(shí)驗(yàn)室（武漢）自制隨機(jī)定位雙光子顯微鏡LeicaTCSSP5激光共聚焦掃描顯微鏡基本原理相差、DIC常用熒光標(biāo)記共聚焦原理Twowaystoobtai
4、ncontrastinlightmicroscopy.Thestainedportionsofthecellin(Areducetheamplitudeoflightwavesofparticularwavelengthspassingthroughthem.Acoloredimageofthecellistherebyobtainedthatisvisibleintheordinaryway.Lightpassingthroughtheunstained,livingcell(Bundergoesverylittlech
5、angeinamplitude,andthestructuraldetailscannotbeseeneveniftheimageishighlymagnified.Thephaseofthelight,however,isalteredbyitspassagethroughthecell,andsmallphasedifferencescanbemadevisiblebyexploitinginterferenceeffectsusingaphase-contrastoradifferential-interferenc
6、e-contrastmicroscope.D.Phase-contrastoradifferential-interference-contrastmicroscopeFourtypesoflightmicroscopy.(ATheimageofafibroblastincultureobtainedbythesimpletransmissionoflightthroughthecell,atechniqueknownasbright-fieldmicroscopy.Theotherimageswereobtainedby
7、techniquesdiscussedinthetext:(Bphase-contrastmicroscopy,(CNomarskidifferential-interference-contrastmicroscopy,and(Ddark-fieldmicroscopy.常用熒光探針ProteinsNucleicAcidsDNAIonspHSensitiveIndicatorsOxidationStatesSpecificOrganelles熒光顯微鏡原理明場：透射熒光：落射落射的優(yōu)點(diǎn)：物鏡的聚光鏡作用使視場均勻，發(fā)射光
8、強(qiáng)度高。激發(fā)光損失小，熒光效應(yīng)高。共聚焦原理由于pinhole的存在，使得部分雜散光（虛線部分）沒有被PMT探測器探測到，從而提高了成像效果。通過對樣品在x-y方向上的逐點(diǎn)掃描，可以形成二維圖像。如果調(diào)解焦平面在z方向的位置，連續(xù)掃描多個(gè)不同z位置的二維圖像，則可以形成一個(gè)3D圖像，3D的重建需要軟件的
