0酸檢測試劑盒（pcr-熒光探針法）使用說明書

《0酸檢測試劑盒（pcr-熒光探針法）使用說明書》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒（1型）核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）使用說明書【產(chǎn)品名稱】通用名稱：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒（1型）核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）商品名稱：無英文名稱：DetectionkitforHBV,HCV,andHIV-1(Real-timePCR)【包裝規(guī)格】本產(chǎn)品的試劑組份包括核酸提取和核酸擴(kuò)增兩個(gè)部分：核酸提取試劑96人份/盒核酸擴(kuò)增試劑96人份/盒【檢驗(yàn)原理】病毒核酸提取采用磁珠法核酸純化技術(shù)，純化系統(tǒng)采用ChemagicSTAR液

2、體處理工作站。該系統(tǒng)可以自動(dòng)完成樣本和假病毒內(nèi)標(biāo)中的核酸的純化過程，內(nèi)標(biāo)對單個(gè)樣本的整個(gè)檢測過程（包括核酸純化和擴(kuò)增檢測）的有效性能起到監(jiān)控作用。核酸純化過程可依次分為病毒裂解，核酸與磁珠結(jié)合，洗滌，核酸洗脫四個(gè)過程。首先，樣本中的病毒在裂解液和蛋白酶的作用下裂解釋放出核酸，然后帶負(fù)電荷的核酸在胍鹽，高離子強(qiáng)度條件以及結(jié)合液的作用下，和表面帶正電的磁珠相結(jié)合，再通過兩次洗液洗滌后，樣本中潛在的PCR抑制成分以及裂解液和洗液A中的鹽成分被除去。最后，磁珠經(jīng)加熱干燥后，重懸于洗脫液，核酸從磁珠表面脫落從而完成了整

3、個(gè)核酸純化過程，核酸檢測采用PCR或一步法RT-PCR結(jié)合熒光探針的體外擴(kuò)增檢測技術(shù)（PCR-熒光法），在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)體系中同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)FAM和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)BHQ1。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’－3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步，從而對

4、血清或血漿樣本中的核酸實(shí)現(xiàn)定性檢測。內(nèi)標(biāo)檢測所使用的引物與病毒核酸檢測相同，而探針序列不同，探針標(biāo)記的報(bào)告和淬滅基團(tuán)分別為HEX和BHQ1?！局饕M成成分】類別試劑名稱組成試劑盒A裂解液120ml×1瓶磁珠懸液650μl×16支結(jié)合液150ml×1瓶洗滌液A300ml×1瓶洗滌液B300ml×1瓶洗脫液0.95ml×16支試劑盒BHBV主反應(yīng)液A1536μl×1支HCV/HIV主反應(yīng)液A748.8μl×2支HBV反應(yīng)液B100μl×1支HCV反應(yīng)液B100μl×1支HIV反應(yīng)液B100μl×1支反應(yīng)液C240

5、μl×1支反應(yīng)液D80μl×1支DEPC水1ml×1支內(nèi)標(biāo)1160μl×2支蛋白酶1160μl×2支PolyARNA320μl×1支陽性標(biāo)準(zhǔn)品1.3ml×1支陰性對照1.3ml×1支配套儀器：全自動(dòng)核酸提取工作站Chemagic-Star24；多通道熒光定量PCR儀ABI7500；手掌式離心機(jī)；平板離心機(jī)。配套耗材：24超深孔板磁棒套管洗脫管Hamilton1ml移液吸頭96孔PCR反應(yīng)板及配套管蓋【適用范圍】定性檢測血漿或血清樣本中乙型肝炎病毒DNA、丙型肝炎病毒RNA和人類免疫缺陷病毒I型RNA，主要適用

6、于血制品和血液核酸篩查?！咀⒁馐马?xiàng)、警示以及提示性內(nèi)容】1.試劑盒各組分使用前需使其完全融化并搖勻，離心管內(nèi)的試劑還需離心數(shù)秒使內(nèi)容物沉于管底。2.樣本處理和核酸擴(kuò)增應(yīng)在完全隔離的實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。3.實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格的相關(guān)培訓(xùn)并具有一定經(jīng)驗(yàn)。4.實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)穿著無紡工作服，并戴一次性的手套、口罩和帽子，帽子應(yīng)將頭發(fā)完全包住。5.建議使用帶濾芯的吸頭以防止交叉污染。6.所有耗材均為一次性用品，切勿重復(fù)使用。7.實(shí)驗(yàn)中使用的所有儀器，如核酸提取儀，離心機(jī)，超凈臺，移液器，PCR儀等，應(yīng)定期用70%乙醇擦拭。8.試

7、驗(yàn)中廢棄的吸頭應(yīng)棄于含1%次氯酸鈉溶液的廢液缸中，以防止污染。9.操作病毒陽性樣本時(shí)，請按照傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作?！緝Υ鏃l件】試劑盒A儲存于室溫。試劑盒B儲存于-20℃。【有效期限】本試劑盒有效期為6個(gè)月，請務(wù)必在有效期內(nèi)使用?！緲?biāo)本的收集和儲存】1.樣本可采用血清或血漿樣本。血漿樣本的收集可采用EDTA,CPD,CPDA1,CP2D,ACDA和4%檸檬酸鈉抗凝。需注意樣本的處理時(shí)間和溫度，過高的環(huán)境溫度會(huì)影響樣本的穩(wěn)定性。1.抗凝的血液樣本應(yīng)在48小時(shí)內(nèi)，采用800–1,600xg離心20minutes

8、的方法分離血漿。采集的血漿樣本于2~8℃保存，如果3天內(nèi)不能用于檢測，應(yīng)將血漿轉(zhuǎn)移到新的無菌采血管或無菌離心管中，儲存于-20℃或更低的溫度，保存期30天左右。凍存的血漿在檢測前應(yīng)避免不必要的凍融（凍融次數(shù)勿超過3次）。2.保存血漿樣本的采血管應(yīng)使用與HAMILTONMicrolabSTAR載架配套的13x100mm玻璃或塑料無菌采血管。血漿的體積不少于3ml。3.采集的全血樣本切勿凍存。4.肝素對