黃芩苷酶的制備及其理化性質(zhì)研究

《黃芩苷酶的制備及其理化性質(zhì)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、黃芩苷酶的制備及其理化性質(zhì)研究任慧霞張敏山東大學(xué)藥學(xué)院生化與生物技術(shù)藥物研究所（濟(jì)南250012）摘要：目的研究黃芩苷酶的制備及其理化性質(zhì)。方法采用提取、透析、sephadexG150凝膠柱層析及冷凍干燥的方法獲得黃芩苷酶；利用Linewear-Burk作圖法求得該酶對(duì)黃芩苷的Km值，研究了pH值、溫度、離子強(qiáng)度、底物濃度等對(duì)黃芩苷酶活力的影響。結(jié)果該酶對(duì)黃芩苷的Km值為57.4mmol/L，最適pH值為5.8，溫度為45℃，不同離子的影響、分子量，底物濃度及產(chǎn)物對(duì)該酶活性基本無(wú)影響，反應(yīng)初速度隨酶濃度的增

2、加而增加并呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性關(guān)系。結(jié)論獲得活性較高理化性質(zhì)較穩(wěn)定的一種黃芩苷酶。關(guān)鍵詞：黃芩苷；糖苷酶；理化性質(zhì)關(guān)于PreparationandCharacterizationaboutflavonoidsGlycosidaseRENHui-xiaZHANGMin,InstitueofBiochemicalandBiotechnologicalDrug,SchoolofPharmaceuticalScience,ShandongUniversity,Jinan250012Abstract：PurposeTome

3、asuretheKmofthisflavonoidsGlycosidasefromScutellariabaicalensisGeorgiwithbaicalin，studytheeffectofpH,temperature,ionicstrengthandsubstrateconcentrationonenzymeactivity,andthelinearrelationofenzymeconcentration.MethodsUsingmeansofcollectionanddislysis,sepha

4、dexG150columnchromatographytopreparecrudeenzyme.MeasuringKmbyLinewear-Burkgraphicmethod,calculatetheenzymeactivitybymeasuringtheabsorbanceofbaicaleinat450nmwithultravioletspectrophotometry.ResultsTheKmwithbaicaleinis57.4mmol/L,itsoptimumpH,temperature,ioni

5、cstrengthandsubstrateconcentrationis5.8,45℃,1mol/L，40mmol/L，respectively.ConclusionThephysico-chemicalpropertyofthisnewflavonoidsGlycosidasefromScutellariabaicalensisGeorgiwasstudied.Keywords:Glycosidase;Characterization；　糖苷酶是指一類(lèi)以?xún)?nèi)切或外切方式水解各種含糖化合物(包括單糖苷、寡糖、

6、多糖、皂甙、糖蛋白等)中的糖苷鍵,生成單糖、寡糖或糖復(fù)合物的酶，它是維持生物體基本功能的重要酶類(lèi)之一,在自然界廣有分布,幾乎各種類(lèi)型的動(dòng)、植物和微生物中,都有糖苷酶存在[1，2]。常根據(jù)其降解的底物對(duì)其命名，,如水解β-D-葡萄糖苷鍵的酶稱(chēng)為β-D-葡萄糖苷酶，水解甘露糖苷鍵的酶稱(chēng)為甘露糖苷酶。本實(shí)驗(yàn)室研究的主要是能將黃芩中黃芩苷降解為黃芩素的一類(lèi)糖苷酶，故稱(chēng)之為黃芩黃苷酶?！↑S芩為唇形科植物黃芩（ScutellariabaicalensisGeorgi）的干燥根。在臨床中屬常用中藥，用于治療上呼吸道感染、

7、泌尿系統(tǒng)感染、菌痢、肝炎、高血壓等[3]?！↑S芩苷(baicalin)是黃芩中主要的有效成分之一,屬葡萄糖醛酸苷類(lèi),水解后產(chǎn)生黃芩素和葡萄糖醛酸,具有清熱解毒、抗炎、利膽、降壓、利尿、抗變態(tài)反應(yīng)等多方面的作用[4]。本文主要對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行了初步的研究，測(cè)定了其動(dòng)力學(xué)常數(shù)Km值，考查了pH值、溫度、離子強(qiáng)度、底物濃度對(duì)酶活力的影響，以及酶濃度的線(xiàn)性關(guān)系。1材料與方法1.1材料酶提取植物原料，實(shí)驗(yàn)室購(gòu)得；黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品，實(shí)驗(yàn)室自制；黃芩素標(biāo)準(zhǔn)品，實(shí)驗(yàn)室自制；透析袋，；sephadexG150，SIGMA公司；其

8、他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。AKTAexplorer快速蛋白質(zhì)純化系統(tǒng),AmershamBiosciences公司；UV-2102PC型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，Unico上海儀器有限公司；冷凍離心機(jī)，Heraeus公司；FD-1-55冷凍干燥機(jī)，北京博醫(yī)康試驗(yàn)儀器有限公司。方法1.2.1粗酶的分離純化1.2.1.1原料的預(yù)處理：稱(chēng)取原料植物干燥粉末25g，加入十倍體積的蒸餾水溶解置于45℃烘箱內(nèi)過(guò)夜后，抽濾，棄殘?jiān)Ａ羯锨?/p>