黃芩苷酶的制備及其理化性質(zhì)研究

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1、黃芩苷酶的制備及其理化性質(zhì)研究任慧霞張敏山東大學(xué)藥學(xué)院生化與生物技術(shù)藥物研究所（濟(jì)南250012）摘要：目的研究黃芩苷酶的制備及其理化性質(zhì)。方法采用提取、透析、sephadexG150凝膠柱層析及冷凍干燥的方法獲得黃芩苷酶；利用Linewear-Burk作圖法求得該酶對黃芩苷的Km值，研究了pH值、溫度、離子強(qiáng)度、底物濃度等對黃芩苷酶活力的影響。結(jié)果該酶對黃芩苷的Km值為57.4mmol/L，最適pH值為5.8，溫度為45℃，不同離子的影響、分子量，底物濃度及產(chǎn)物對該酶活性基本無影響，反應(yīng)初速度隨酶濃度的增加而增加并呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2、結(jié)論獲得活性較高理化性質(zhì)較穩(wěn)定的一種黃芩苷酶。關(guān)鍵詞：黃芩苷；糖苷酶；理化性質(zhì)關(guān)于PreparationandCharacterizationaboutflavonoidsGlycosidaseRENHui-xiaZHANGMin,InstitueofBiochemicalandBiotechnologicalDrug,SchoolofPharmaceuticalScience,ShandongUniversity,Jinan250012Abstract：PurposeTomeasuretheKmofthisflavonoidsGlyc

3、osidasefromScutellariabaicalensisGeorgiwithbaicalin，studytheeffectofpH,temperature,ionicstrengthandsubstrateconcentrationonenzymeactivity,andthelinearrelationofenzymeconcentration.MethodsUsingmeansofcollectionanddislysis,sephadexG150columnchromatographytopreparecrudeenzy

4、me.MeasuringKmbyLinewear-Burkgraphicmethod,calculatetheenzymeactivitybymeasuringtheabsorbanceofbaicaleinat450nmwithultravioletspectrophotometry.ResultsTheKmwithbaicaleinis57.4mmol/L,itsoptimumpH,temperature,ionicstrengthandsubstrateconcentrationis5.8,45℃,1mol/L，40mmol/L，

5、respectively.ConclusionThephysico-chemicalpropertyofthisnewflavonoidsGlycosidasefromScutellariabaicalensisGeorgiwasstudied.Keywords:Glycosidase;Characterization；　糖苷酶是指一類以內(nèi)切或外切方式水解各種含糖化合物(包括單糖苷、寡糖、多糖、皂甙、糖蛋白等)中的糖苷鍵,生成單糖、寡糖或糖復(fù)合物的酶，它是維持生物體基本功能的重要酶類之一,在自然界廣有分布,幾乎各種類型的動、植物和微生物

6、中,都有糖苷酶存在[1，2]。常根據(jù)其降解的底物對其命名，,如水解β-D-葡萄糖苷鍵的酶稱為β-D-葡萄糖苷酶，水解甘露糖苷鍵的酶稱為甘露糖苷酶。本實驗室研究的主要是能將黃芩中黃芩苷降解為黃芩素的一類糖苷酶，故稱之為黃芩黃苷酶?！↑S芩為唇形科植物黃芩（ScutellariabaicalensisGeorgi）的干燥根。在臨床中屬常用中藥，用于治療上呼吸道感染、泌尿系統(tǒng)感染、菌痢、肝炎、高血壓等[3]。　黃芩苷(baicalin)是黃芩中主要的有效成分之一,屬葡萄糖醛酸苷類,水解后產(chǎn)生黃芩素和葡萄糖醛酸,具有清熱解毒、抗炎、利膽、降壓、利

7、尿、抗變態(tài)反應(yīng)等多方面的作用[4]。本文主要對其理化性質(zhì)進(jìn)行了初步的研究，測定了其動力學(xué)常數(shù)Km值，考查了pH值、溫度、離子強(qiáng)度、底物濃度對酶活力的影響，以及酶濃度的線性關(guān)系。1材料與方法1.1材料酶提取植物原料，實驗室購得；黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品，實驗室自制；黃芩素標(biāo)準(zhǔn)品，實驗室自制；透析袋，；sephadexG150，SIGMA公司；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。AKTAexplorer快速蛋白質(zhì)純化系統(tǒng),AmershamBiosciences公司；UV-2102PC型紫外可見分光光度計，Unico上海儀器有限公司；冷凍離心機(jī)，Heraeus公司；

8、FD-1-55冷凍干燥機(jī)，北京博醫(yī)康試驗儀器有限公司。方法1.2.1粗酶的分離純化1.2.1.1原料的預(yù)處理：稱取原料植物干燥粉末25g，加入十倍體積的蒸餾水溶解置于45℃烘箱內(nèi)過夜后，抽濾，棄殘渣保留上清