資源描述:
《黃芩苷酶的制備及其理化性質(zhì)研究》由會員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、黃芩苷酶的制備及其理化性質(zhì)研究任慧霞張敏山東大學(xué)藥學(xué)院生化與生物技術(shù)藥物研究所(濟(jì)南250012)摘要:目的研究黃芩苷酶的制備及其理化性質(zhì)。方法采用提取、透析、sephadexG150凝膠柱層析及冷凍干燥的方法獲得黃芩苷酶;利用Linewear-Burk作圖法求得該酶對黃芩苷的Km值,研究了pH值、溫度、離子強(qiáng)度、底物濃度等對黃芩苷酶活力的影響。結(jié)果該酶對黃芩苷的Km值為57.4mmol/L,最適pH值為5.8,溫度為45℃,不同離子的影響、分子量,底物濃度及產(chǎn)物對該酶活性基本無影響,反應(yīng)初速度隨酶濃度的增加而增加并呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。
2、結(jié)論獲得活性較高理化性質(zhì)較穩(wěn)定的一種黃芩苷酶。關(guān)鍵詞:黃芩苷;糖苷酶;理化性質(zhì)關(guān)于PreparationandCharacterizationaboutflavonoidsGlycosidaseRENHui-xiaZHANGMin,InstitueofBiochemicalandBiotechnologicalDrug,SchoolofPharmaceuticalScience,ShandongUniversity,Jinan250012Abstract:PurposeTomeasuretheKmofthisflavonoidsGlyc
3、osidasefromScutellariabaicalensisGeorgiwithbaicalin,studytheeffectofpH,temperature,ionicstrengthandsubstrateconcentrationonenzymeactivity,andthelinearrelationofenzymeconcentration.MethodsUsingmeansofcollectionanddislysis,sephadexG150columnchromatographytopreparecrudeenzy
4、me.MeasuringKmbyLinewear-Burkgraphicmethod,calculatetheenzymeactivitybymeasuringtheabsorbanceofbaicaleinat450nmwithultravioletspectrophotometry.ResultsTheKmwithbaicaleinis57.4mmol/L,itsoptimumpH,temperature,ionicstrengthandsubstrateconcentrationis5.8,45℃,1mol/L,40mmol/L,
5、respectively.ConclusionThephysico-chemicalpropertyofthisnewflavonoidsGlycosidasefromScutellariabaicalensisGeorgiwasstudied.Keywords:Glycosidase;Characterization; 糖苷酶是指一類以內(nèi)切或外切方式水解各種含糖化合物(包括單糖苷、寡糖、多糖、皂甙、糖蛋白等)中的糖苷鍵,生成單糖、寡糖或糖復(fù)合物的酶,它是維持生物體基本功能的重要酶類之一,在自然界廣有分布,幾乎各種類型的動、植物和微生物
6、中,都有糖苷酶存在[1,2]。常根據(jù)其降解的底物對其命名,,如水解β-D-葡萄糖苷鍵的酶稱為β-D-葡萄糖苷酶,水解甘露糖苷鍵的酶稱為甘露糖苷酶。本實(shí)驗(yàn)室研究的主要是能將黃芩中黃芩苷降解為黃芩素的一類糖苷酶,故稱之為黃芩黃苷酶?!↑S芩為唇形科植物黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根。在臨床中屬常用中藥,用于治療上呼吸道感染、泌尿系統(tǒng)感染、菌痢、肝炎、高血壓等[3]?!↑S芩苷(baicalin)是黃芩中主要的有效成分之一,屬葡萄糖醛酸苷類,水解后產(chǎn)生黃芩素和葡萄糖醛酸,具有清熱解毒、抗炎、利膽、降壓、利
7、尿、抗變態(tài)反應(yīng)等多方面的作用[4]。本文主要對其理化性質(zhì)進(jìn)行了初步的研究,測定了其動力學(xué)常數(shù)Km值,考查了pH值、溫度、離子強(qiáng)度、底物濃度對酶活力的影響,以及酶濃度的線性關(guān)系。1材料與方法1.1材料酶提取植物原料,實(shí)驗(yàn)室購得;黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品,實(shí)驗(yàn)室自制;黃芩素標(biāo)準(zhǔn)品,實(shí)驗(yàn)室自制;透析袋,;sephadexG150,SIGMA公司;其他試劑均為國產(chǎn)分析純。AKTAexplorer快速蛋白質(zhì)純化系統(tǒng),AmershamBiosciences公司;UV-2102PC型紫外可見分光光度計,Unico上海儀器有限公司;冷凍離心機(jī),Heraeus公司;
8、FD-1-55冷凍干燥機(jī),北京博醫(yī)康試驗(yàn)儀器有限公司。方法1.2.1粗酶的分離純化1.2.1.1原料的預(yù)處理:稱取原料植物干燥粉末25g,加入十倍體積的蒸餾水溶解置于45℃烘箱內(nèi)過夜后,抽濾,棄殘渣保留上清