肝炎病毒的常見檢測手段［ppt課件］

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1、肝炎病毒的常見檢測手段劉穎乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus）是指引起人類急、慢性肝炎的DNA病毒,也稱丹氏顆粒，簡稱HBV。我國的乙肝病毒感染率約60%-70%；乙肝表面抗原攜帶率約占總?cè)丝诘?.18%，以此計算，全國約有9300萬人攜帶乙肝病毒，其中乙肝患者大約有3000萬乙型肝炎病毒(HBV)屬嗜肝DNA病毒科(hepadnaviridae)，基因組長約3.2kb，為部分雙鏈環(huán)狀DNA。HBV的抵抗力較強(qiáng)，但65℃10小時、煮沸10分鐘或高壓蒸氣均可滅活HBV。含氯制劑、環(huán)氧乙烷、戊二醛、過氧乙酸和

2、碘伏等也有較好的滅活效果肝炎病毒的分類肝炎病毒是醫(yī)學(xué)術(shù)語，指引起病毒性肝炎的病原體。人類肝炎病毒有甲型、乙型、丙型、丁型和戊型和庚型病毒之分。甲型肝炎病毒呈球形，無包膜，核酸為單鏈RNA。乙型肝炎病毒呈球形，具有雙層外殼結(jié)構(gòu)，外層相當(dāng)一般病毒的包膜，核酸為雙鏈DNA。除乙型肝炎病毒遺傳物質(zhì)為雙鏈DNA外，其他類型病毒均為單鏈RNA。除了甲型和戊型病毒為通過腸道感染外，其他類型病毒均通過密切接觸、血液和注射方式傳播。乙肝病毒基因目前，已可從感染HBV病人的血清中及感染肝臟提純的病毒核心中分離出環(huán)狀雙股DNA，從而確定HBV屬DN

3、A病毒。目前，由于克隆化DNA完整核苷酸已經(jīng)確定，現(xiàn)已證實HBsAg和HBcAg都是由Dana顆粒的DNA所編碼，并且二類基因存在同一DNA分子上。有人比較病毒基因編碼能力和病毒多少，發(fā)現(xiàn)HBVDNA負(fù)鏈能編碼全部已知的HBV蛋白質(zhì)，而其正鏈開放讀碼區(qū)，不能編碼病毒蛋白。HBVDNA負(fù)鏈有四個開放區(qū)，分別稱為S、C、P及X，能編碼全部已知的HBV蛋白質(zhì)。S區(qū)可分為二部分，S基因和前S基因。S基因能編碼主要表面蛋白。S基因之前是一個能編碼163個氨基酸的前S基因，編碼PreS1和PreS2蛋白。C區(qū)基因包括前C基因和C基因，分別

4、編碼HBeAg和HBcAg。P區(qū)最長，約占基因組75%以上，編碼病毒體DNA多聚酶。X區(qū)可能編碼有154個氨基酸的堿性多肽。乙肝的抗原HBV的抗原有3種：表面抗原（HBsAg）、核心抗原（HBcAg）和e抗原（HBeAg）。表面抗原大量存在于感染者血液中，是HBV感染以及檢測的主要標(biāo)志。它具有抗原性，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異保護(hù)性的抗-HBs，也是制備疫苗的最主要成分。核心抗原由183個或185個氨基酸組成，高度磷酸化，是乙肝病毒核心顆粒的唯一結(jié)構(gòu)蛋白。正由于它存在于Dane顆粒核心結(jié)構(gòu)表面，被表面抗原覆蓋，故不易在血循環(huán)中檢出。核

5、心抗原具有強(qiáng)免疫原性，可誘導(dǎo)很強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗-HBc。e抗原為可溶性蛋白質(zhì)，傳染性強(qiáng)，游離存在于血液中，雖然很早就被發(fā)現(xiàn)，在病理上認(rèn)為是HBV復(fù)制以具有強(qiáng)感染性的一個指標(biāo)，但其功能尚不清楚?？?HBe的出現(xiàn)，是預(yù)后良好的征象?；谝腋尾《净驒z查的方法主要有：熒光PCR法、競爭PCR法、PCR酶聯(lián)免疫吸附法、熒光標(biāo)記物法和PCR酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光等方法。這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，所使用的儀器設(shè)備、試劑品質(zhì)源于不同的國家和地區(qū)，設(shè)立的標(biāo)準(zhǔn)曲線以及標(biāo)準(zhǔn)熒光等各不相同，得出的數(shù)值左右漂浮，偏差很大，得出的檢測值范圍也不相

6、同。HBV-DNA檢測則是采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)，特異性擴(kuò)增乙肝病毒基因組保守的C基因區(qū)上270bp基因片段，以近于2n的指數(shù)（n為循環(huán)次數(shù)），在數(shù)小時內(nèi)可將極微量的HBV-DNA特定的分子片斷擴(kuò)增至1x107～1x108倍，大大提高了HBV的檢出率，為臨床診斷是否為HBV感染提供了一種強(qiáng)有力的手段。ELSAELISA方法一直是臨床診斷HBV感染的傳統(tǒng)手段，反映機(jī)體HBV感染的免疫狀態(tài)?；瘜W(xué)發(fā)光是基于ELISA基礎(chǔ)上通過改變檢測系統(tǒng)建立的新方法。乙肝五項指標(biāo)臨床監(jiān)測意義HBsAg抗-HBsHBeAg抗HBe抗-HBc

7、1、-----過去和現(xiàn)在均未感染HBV2、----+曾感染HBV，急性感染恢復(fù)期3、---++過去和現(xiàn)在均已感染過HBV4、-+---預(yù)防注射疫苗5、-+-++既往感染；急性HBV感染恢復(fù)期6、-+--+既往感染；急性HBV感染已恢復(fù)7、+---+急性HBV感染；慢性HBsAg攜帶者8、+--++急性HBV感染趨向恢復(fù)；慢性HBsAg攜帶者，傳染性弱；長期持續(xù)易癌變9、+-+-+急性或慢性乙肝，傳染性極強(qiáng)10、+----急性HBV感染早期，HBsAg攜帶者11、+-+--急性HBV感染早期，傳染性強(qiáng)12、--+++急性感染中期

8、13、+-+++急性感染趨向恢復(fù)；慢性攜帶者14、+--+-急性感染趨向恢復(fù)15、---+-急性感染趨向恢復(fù)16、-+-+-HBV感染已恢復(fù)側(cè)向?qū)游隹乖?、抗體特異性毛細(xì)層析為原動力以膠體金或者乳膠作為失蹤標(biāo)記物的檢測手段方法學(xué)比較RT-PCR酶免層析靈敏度好較好較好特異性好較