血管端端吻合法建立雙側(cè)供腎大鼠腎移植模型

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1、血管端端吻合法建立雙側(cè)供腎大鼠腎移植模型【關(guān)鍵詞】靜脈吻合腎移植動(dòng)物模型大鼠大鼠腎移植模型是研究移植免疫排斥反應(yīng)及各種藥物對(duì)移植腎影響的重要?jiǎng)游锬Ｐ汀ahlavan等[1]認(rèn)為對(duì)于大鼠腎移植模型，腎動(dòng)脈端端吻合是金標(biāo)準(zhǔn)，最為推薦腎靜脈端端吻合。目前，國(guó)內(nèi)尚無(wú)不阻斷腹主動(dòng)脈和后腔靜脈血流的血管端端吻合雙側(cè)供腎大鼠腎移植模型的相關(guān)報(bào)道。我們參閱相關(guān)文獻(xiàn)，成功建立了無(wú)需阻斷腹主動(dòng)脈、后腔靜脈血流，無(wú)需支架支撐血管壁的一種血管端端吻合雙側(cè)供腎大鼠腎移植模型，為移植排斥反應(yīng)、移植免疫耐受等研究提供了一個(gè)簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、省時(shí)的方法

2、。1材料和方法1.1材料1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物受體、供體均為清潔級(jí)健康雄性SD大鼠，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海動(dòng)物研究所，平均體質(zhì)量（275±25）g。1.1.2手術(shù)器械HCX803顯微外科手術(shù)器械（寧波市成和顯微器械廠(chǎng)），90醫(yī)用無(wú)損傷縫合線(xiàn)，顯微外科血管夾，SXP1雙人雙目外科手術(shù)顯微鏡（上海醫(yī)用光學(xué)儀器廠(chǎng)），0.9×30靜脈套管留置針，無(wú)菌冰盒，沖洗針，嬰兒腹壁撐開(kāi)器等。1.1.3藥品1%氯胺酮溶液、125U·ml-1肝素鈉生理鹽水溶液、含肝素鈉林格液（4℃）、青霉素鈉針劑、碘伏、0.25%利多卡因+0.2%罌粟堿生

3、理鹽水溶液。1.2方法1.2.1麻醉及術(shù)前處理供體術(shù)前無(wú)需禁食、禁水，受體術(shù)前12h禁食不禁水，供、受體均以1%氯胺酮溶液按1ml·（100g）-1腹腔注射麻醉。1.2.2供體手術(shù)麻醉成功后固定，碘伏常規(guī)消毒，腹正中十字切口，4線(xiàn)牽拉固定。濕鹽水紗布包裹胃、腸、脾置右側(cè)腹腔外。采用水分離法[2]游離左腎及其動(dòng)、靜脈，游離腹主動(dòng)脈和后腔靜脈，前至主動(dòng)脈裂孔和肝臟，后至腹主動(dòng)脈分叉前方，除去血管周?chē)竞徒Y(jié)締組織；同法分離出右腎及腎動(dòng)、靜脈。于腎靜脈后方向后游離輸尿管，直至膀胱，暴露輸尿管膀胱連接處。以輸尿管開(kāi)口為中心切

4、取半徑約3mm的膀胱瓣。于腹主動(dòng)脈分叉處頭側(cè)包繞主動(dòng)脈和后腔靜脈預(yù)置1根0號(hào)絲線(xiàn)，腎動(dòng)脈前方1cm預(yù)置2根0號(hào)絲線(xiàn)，分別包繞主動(dòng)脈及后腔靜脈。結(jié)扎、切斷腸系膜上動(dòng)脈，結(jié)扎、切斷腎上腺動(dòng)、靜脈并留標(biāo)記尾線(xiàn)。經(jīng)陰莖背靜脈注入肝素125U后，分別結(jié)扎預(yù)置線(xiàn)，于腹主動(dòng)脈分叉結(jié)扎線(xiàn)近心端插入靜脈留置針，以4℃含肝素鈉林格液灌洗雙側(cè)腎臟，灌注壓力保持在80cmH2O（7.85kPa)，至雙腎成均一淺土黃色、雙腎靜脈流出液清亮為止，迅速用冰屑覆蓋雙腎。齊主動(dòng)脈壁處剪斷左右腎動(dòng)脈，齊后腔靜脈管壁處剪斷左腎靜脈，平左腎靜脈前緣及后腔靜

5、脈結(jié)扎線(xiàn)前方剪斷后腔靜脈，并將其修剪成右腎靜脈的一部分。右腎靜脈和后腔靜脈的距離非常短，因不能很好的固定血管夾以至于行原位右腎靜脈的端端吻合非常困難；又因大鼠腎靜脈直徑與后腔靜脈直徑相近，故我們將后腔靜脈的一部分修整為腎靜脈的一部分以延長(zhǎng)右腎靜脈，并將右腎放置左腎窩處，以便行右腎移植及腎靜脈的端端吻合術(shù)。供腎置于盛有0～4℃肝素生理鹽水的無(wú)菌冰盒中。1.2.3受體手術(shù)碘伏消毒，經(jīng)正中切口進(jìn)腹；腸、胃、脾用濕鹽水紗布保護(hù)推向右上腹，充分暴露左腎及左腎動(dòng)、靜脈，固定。水分離法仔細(xì)解剖腎門(mén)處血管至后腔靜脈、腹主動(dòng)脈，充分顯

6、露左腎動(dòng)、靜脈及左腎上腺動(dòng)、靜脈；結(jié)扎、切斷左腎上腺動(dòng)、靜脈并留標(biāo)記尾線(xiàn)。近后腔靜脈和腹主動(dòng)脈的腎動(dòng)、靜脈處，血管夾阻斷已游離的腎動(dòng)、靜脈，近腎門(mén)標(biāo)記線(xiàn)外側(cè)遠(yuǎn)端剪斷腎動(dòng)、靜脈，肝素鈉鹽水沖洗血管斷端及管腔內(nèi)殘存的血液，移除左腎（圖1）。供腎置于受體左腎窩處、冰屑紗布覆蓋。在10倍顯微鏡下先吻合靜脈再吻合動(dòng)脈。以腎上腺動(dòng)脈斷端標(biāo)記線(xiàn)為縫合第一針的進(jìn)針標(biāo)志，行腎動(dòng)脈兩定點(diǎn)間斷端端吻合，縫合8～10針；供、受體腎靜脈三定點(diǎn)間斷端端吻合，由于腎靜脈較薄且易粘貼，故在腎窩處噴入生理鹽水以將受、供體腎靜脈浸入生理鹽水，將腎上腺靜

7、脈斷端標(biāo)記線(xiàn)向頭側(cè)放置（右腎將后腔靜脈結(jié)扎線(xiàn)結(jié)擺向頭側(cè)）；輕抖生理鹽水中靜脈管壁數(shù)次，靜脈壁會(huì)自動(dòng)散開(kāi)，顯露出靜脈斷端和管腔，以標(biāo)記線(xiàn)為吻合標(biāo)志，縫合12～16針（圖2～4）。吻合完畢后，先用血管夾鉗夾腎門(mén)血管，撤去腎靜脈血管夾檢查靜脈吻合口，再撤去腎動(dòng)脈血管夾檢查動(dòng)脈吻合口，待檢查滿(mǎn)意后，再開(kāi)放腎門(mén)血管夾（圖5、6），數(shù)秒內(nèi)可見(jiàn)移植腎實(shí)質(zhì)迅速充盈變紅。動(dòng)、靜脈吻合口出血時(shí)可用小棉球持續(xù)輕壓片刻，一般滲血均能停止，必要時(shí)補(bǔ)針。固定移植腎。切開(kāi)膀胱側(cè)壁2～3mm，理順輸尿管，行輸尿管膀胱瓣膀胱外隧道式吻合；受體右腎血管

8、預(yù)置體外結(jié)扎線(xiàn)。1.2.4術(shù)后處理術(shù)畢，移植大鼠肌肉注射青霉素（50U·g-1）；經(jīng)陰莖背靜脈按需足量補(bǔ)液。移植大鼠麻醉清醒后，即可進(jìn)食。術(shù)后3d，體外結(jié)扎右腎預(yù)留結(jié)扎線(xiàn)。3討論大鼠腎移植模型為移植免疫學(xué)研究的重要工具。目前，國(guó)內(nèi)外大多采用單側(cè)供腎進(jìn)行腎移植動(dòng)物模型建立，應(yīng)用雙側(cè)供腎者尚不多見(jiàn)。Yin等[3]于1994年首次采用供腎動(dòng)脈帶主動(dòng)脈