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《水貂綠膿桿菌(pasd03株)鞭毛蛋白的免疫保護性研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)ImmunoprotectiveefficacyofFlagellinfromMinkPseudomonasAeruginosa(PASD03strain)Thesissubmittedto@ngdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyWuJuan(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Supervisor：Prof．ShanHu，Prof．
2、QinXiaobingQingdao．ChinaJune，2013萬方數(shù)據(jù)獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得青島農(nóng)業(yè)大學或其它教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均己在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：時間：功廖年廠月沖日I關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解青島農(nóng)業(yè)大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權(quán)保留送交論文
3、的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意青島農(nóng)業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學位論文在解密后應遵守此協(xié)議)研究生簽名：時間：％侈年廠月巧13導師簽名：岙吃舛v時間：≯∥年鄉(xiāng)月呷日‘萬方數(shù)據(jù)壹璺壅些太堂亟±堂位監(jiān)塞擅墨水貂綠膿桿菌(PASD03株)鞭毛蛋白的免疫保護性研究摘要綠膿桿菌(銅綠假單胞茵)(Pseudomonasaemginosa，PA)可引起人及多種動物發(fā)病，是一種嚴重危害人類健康及畜牧業(yè)發(fā)展的重要致病茵。近年來，
4、隨著毛皮動物養(yǎng)殖規(guī)模的擴大，疾病竹發(fā)生也逐年增多，尤其是細菌病的危害加大，由水貂綠膿桿菌導致的水貂出血性肺炎常表現(xiàn)為群體的急性暴發(fā)，水貂前期咳嗽，后期體溫升高，呼吸困難，口鼻流血，死亡率逐年增高。綠膿桿菌對外界的抵抗力極強，由于II缶床治療中抗菌藥物的廣泛使用，以及不合理應用，導致綠膿桿菌耐藥菌株不斷出現(xiàn)，耐藥譜不斷擴大，同時也加劇了抗菌藥物在水貂體內(nèi)的殘留，嚴重威脅我國皮毛業(yè)的發(fā)展，給人類造成極大的經(jīng)濟損失。此外綠膿桿菌血清型眾多，不同血清型菌株其免疫原性不盡相同，給綠膿桿菌疫苗的研制帶來很大困難。我國養(yǎng)殖業(yè)中的綠膿桿菌耐
5、藥情況已是十分嚴重，且呈現(xiàn)多重耐藥特性。因此獲得一種理想的疫苗來預防水貂綠膿桿菌病顯得尤為重要。有實驗證明鞭毛蛋白是重要的表面抗原，具有種屬特異性，且不同血清型之間具有相同的鞭毛蛋白免疫原，能產(chǎn)生交叉保護作用。鑒于綠膿桿菌感染的普遍性，以及鞭毛蛋白的特點，本研究通過提取的鞭毛蛋白，并結(jié)合小白鼠免疫模型分析其免疫原性，探討綠膿桿菌鞭毛蛋白疫苗對于綠膿桿菌感染的保護作用，對構(gòu)建綠膿桿菌抗病疫苗和從根本上防止綠膿桿菌的感染具有重要意義。本試驗首先，探索了培養(yǎng)條件對PASD03的鞭毛生長的影響。分別從培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)時間及培養(yǎng)溫度進
6、行培養(yǎng)比較。通過一系列試驗及鞭毛鍍銀染色，最后確定了提取綠膿桿菌鞭毛的最佳條件：液體培養(yǎng)基搖床培養(yǎng)更適合于綠膿桿菌快速生長，適合鞭毛發(fā)育，能在短時間培養(yǎng)內(nèi)進行鞭毛染色；培養(yǎng)時間從22小時至48小時都能染出鞭毛，而這個時間和細菌生長階段的對數(shù)生長期相吻合，為了進一步確定細菌出現(xiàn)鞭毛的最佳時機，又進行了OD值與鞭毛生長規(guī)律的研究，鞭毛染色鏡檢，繪制生長曲線。結(jié)果顯示PASD03進入對數(shù)生長期，幾乎每個時間段都能染出鞭毛，為了保證鞭毛的提取量，必須確保細菌的數(shù)量足夠大，因此在PASD03剛進入對數(shù)期時不易馬上進行鞭毛的提取試驗，而
7、應再讓細茵生長一段時間。即培養(yǎng)時間確定為使細菌進入對數(shù)生長期之后的一段萬方數(shù)據(jù)時間；綠膿桿茵在4-42℃范圍內(nèi)都能生長，而鞭毛生長的最佳培養(yǎng)溫度為37℃左右。其次對PASD03鞭毛蛋白的提取方法進行研究，分別通過酸裂解、差速離心以及酸裂解結(jié)合機械振蕩三種方法，用(NH4)2S04鹽析來獲得鞭毛蛋白，采用垂直板聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS．PAGE)對提取的綠膿桿菌鞭毛蛋白進行分離純化，Western免疫印跡檢測，并進行電鏡鑒定。結(jié)果顯示，成功分離出水貂綠膿桿菌的鞭毛蛋白，獲得了綠膿桿菌鞭毛蛋白的初提液。提純的綠膿桿菌鞭毛蛋白經(jīng)
8、SDS—PAGE顯示為一條蛋白帶，相對分子質(zhì)量m)為53K．Da；Western免疫印跡檢測亦提示條帶在Mr53KDa處，透射電鏡(SEM)觀察表明該鞭毛蛋白呈絲狀；三者均證實該蛋白為同一均質(zhì)蛋白。并且得出：經(jīng)酸裂解法并結(jié)合機械振蕩和硫酸銨沉淀法簡便、耗時短、純度高、產(chǎn)量高，適用于綠膿桿茵
