車前子多糖對(duì)氧化型低密度脂蛋白致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用

《車前子多糖對(duì)氧化型低密度脂蛋白致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文車前子多糖對(duì)氧化型低密度脂蛋白致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用姓名：車文文申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：王素敏20090301中文摘要車前子多糖對(duì)氧化型低密度脂蛋白致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用摘要?jiǎng)用}粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是危害人類健康的主要疾病之一。對(duì)AS防治藥物的研究一直是基礎(chǔ)和臨床研究的重要課題。高脂血癥被認(rèn)為是AS的高危因子之一，其中氧化型低密度脂蛋I芻(oxidizedLowdensityLipoprotein，OX．LDL)是致AS發(fā)生的始動(dòng)因素，它通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化作用導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)

2、胞受損、分泌多種細(xì)胞活性因子和生長(zhǎng)因子，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖、單核細(xì)胞粘附、血小板聚集和泡沫細(xì)胞形成，最終導(dǎo)致粥樣斑塊形成。因此，抑帶tJox．LDL的生成或降低ox．LDL對(duì)機(jī)體的損傷是預(yù)防AS發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵。現(xiàn)今臨床主要應(yīng)用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACE—I)、D．受體阻滯劑、降脂藥、超氧化物歧化酶(SOD)等藥物治療，以試圖改善患者受損的內(nèi)皮功能。但其治療存在兩個(gè)主要問(wèn)題：1、阻斷正常生理功能運(yùn)行所需的物質(zhì)；2、大部分藥物對(duì)肝臟、腎臟有毒副作用。西方現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，AS是屬于病因未明的疾病，最好采用緩解和抑制癥狀為主的醫(yī)療策略。中藥作為人類維護(hù)健康體系的一個(gè)重要組

3、成部分，大多數(shù)是天然藥物，符合“返璞歸真"、“回歸自然”的潮流，與生物一心理一社會(huì)醫(yī)學(xué)模式相適應(yīng)。中國(guó)藥典記載，車前子為車前科(Plantaginceae)植物車前的干燥成熟種子?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明車前子不僅具有清腸通便、降低血脂、調(diào)節(jié)血糖、免疫調(diào)節(jié)的功效，還能抑制脂質(zhì)過(guò)氧化物及自由基的產(chǎn)生，并對(duì)動(dòng)中文摘要脈血管壁的重構(gòu)有重要作用。但是否能改善內(nèi)皮功能損傷尚不清楚，本實(shí)驗(yàn)采用現(xiàn)代技術(shù)手段從車前子中提取得到有效成分車前子多糖(plantainseedpolysaccharide,尸．鏟)，通過(guò)OX．LDL對(duì)培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞體外直接損傷，探討船r尸對(duì)損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)

4、作用及可能機(jī)制，為AS的防治提供進(jìn)一步的理論依據(jù)。一人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)及其鑒定目的：建立簡(jiǎn)單有效且重復(fù)性高的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HumanUmbilicalVeinEndothelialCells，HUVECs)體外原代及傳代培養(yǎng)技術(shù)，并對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定，為進(jìn)一步研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞功能提供重要的實(shí)驗(yàn)方法。方法：(1)配制培養(yǎng)液：分別配制含10％和20％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，然后加入終濃度為15ng／mlVEGF、100U／ml青、鏈霉素，用前調(diào)節(jié)pH值7．O~7．2。(2)HUVECs的原代分離培養(yǎng)：取臍帶(大于20cm)，采用I型膠原酶灌注消化法在臍靜脈中

5、分離內(nèi)皮細(xì)胞，用含20％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)。(3)HUVECs的傳代培養(yǎng)：原代分離的HUVECs生長(zhǎng)匯合至80％后，胰蛋白酶消化，用含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液傳代培養(yǎng)。(4)HUVECs的鑒定：①倒置顯微鏡下每日觀察細(xì)胞形態(tài)、貼壁及生長(zhǎng)情況；②人第Ⅷ因子相關(guān)抗原抗體免疫組化檢測(cè)。結(jié)果：(1)HUVECs生長(zhǎng)情況及形態(tài)學(xué)變化：①生長(zhǎng)時(shí)間：原代分離的內(nèi)皮細(xì)胞2h左右開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞為扁平多角形，24h完全貼壁，變成梭形，7～10d細(xì)胞融合成單層；傳代細(xì)胞分布較均勻，O．5h左右開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)，3-'-'5d長(zhǎng)成單層，細(xì)胞匯合成典型的鋪路石狀。②細(xì)胞形態(tài)：

6、原代培養(yǎng)時(shí)，倒中文摘要置顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞呈小三角形、圓形，多數(shù)細(xì)胞聚集成團(tuán)。生長(zhǎng)活躍期細(xì)胞，呈橢圓形或圓形，邊界清楚、胞質(zhì)豐富，內(nèi)含小顆粒。傳代細(xì)胞較原代細(xì)胞生長(zhǎng)快，細(xì)胞密集，分散均勻，倒置顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞呈短梭形或多角形，胞核變圓，呈鋪路石狀排列，細(xì)胞周圍近胞核處可見(jiàn)明顯光暈，為典型的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)特點(diǎn)，可以確定所培養(yǎng)的細(xì)胞為內(nèi)皮細(xì)胞。(2)第Ⅷ因子相關(guān)抗原抗體免疫組化檢測(cè)：細(xì)胞呈圓形、橢圓形或梭形，胞漿豐富，胞質(zhì)內(nèi)有棕黃色的染色顆粒，細(xì)胞核不著色，呈陽(yáng)性反應(yīng)；而對(duì)照組(力NPBS液)胞質(zhì)內(nèi)無(wú)棕黃色的染色顆粒，呈陰性反應(yīng)，可進(jìn)一步確認(rèn)所分離培養(yǎng)的細(xì)胞是內(nèi)皮細(xì)胞。結(jié)論

7、：血管內(nèi)皮細(xì)胞可從胎兒臍帶中利用O．1％I型膠原酶灌注，在37℃水平搖床上消化10min的方法分離獲得，并且通過(guò)原代和傳代培養(yǎng)成為細(xì)胞系，倒置顯微鏡下觀察到細(xì)胞周圍近胞核處可見(jiàn)明顯光暈，為典型的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)特點(diǎn)，可以確定為內(nèi)皮細(xì)胞；并利用人第Ⅷ因子抗原抗體免疫組化法檢測(cè)，進(jìn)一步鑒定證實(shí)培養(yǎng)的細(xì)胞是血管內(nèi)皮細(xì)胞。二車前子多糖對(duì)氧化型低密度脂蛋白致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用目的：利用OX．LDL對(duì)培養(yǎng)的HUVECs造成脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，觀察PSP對(duì)其保護(hù)作用和探討其可能的機(jī)制。方法：用MTT方法和化學(xué)方法從細(xì)胞水平觀察OX．LDL對(duì)細(xì)胞增殖活性及細(xì)胞上清液中一氧化