資源描述：
《根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的AhNCED1基因轉(zhuǎn)化花生研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、摘要根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的AhNCEDI基因轉(zhuǎn)化花生研究專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)申請者：覃銘導(dǎo)師：李玲花生(ArachishypogaeaL．)是重要的油料作物。由于種質(zhì)資源的局限及缺乏對重要病、蟲、草害的抗性，限制了常規(guī)育種在花生抗性育種中的作用。脫落酸(ABA)作為一種脅迫信號轉(zhuǎn)導(dǎo)物質(zhì)，在植物對水分脅迫的適應(yīng)性反應(yīng)中起著重要作用。在生物和非生物脅迫條件下，植物體內(nèi)的ABA含量增加，這種效應(yīng)主要是通過激活A(yù)BA合成及抑制其降解來實(shí)現(xiàn)，#l-力nABA能顯著提高作物的抗旱性。9．順式環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶(NCED)是調(diào)節(jié)ABA生
2、物合成的關(guān)鍵限速酶，過量表達(dá)朋疆D基因能夠提高轉(zhuǎn)基因植物對脅迫條件的抗性。NCED基因的研究大多集中在擬南芥、豇豆、玉米等植物中，花生腳基因的研究缺乏。本實(shí)驗(yàn)室于2005年從粵油7號葉片中克隆出一個(gè)NCDE基因(命名為AhNCEDl基因)，經(jīng)證明，該基因受干旱誘導(dǎo)表達(dá)，是花生抗旱基因。本論文以干旱敏感品種汕油523為實(shí)驗(yàn)材料，以上胚軸為外植體，旨在研究細(xì)胞分裂素(BA和4．PU)對花生再生體系的影響；建立和優(yōu)化農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花生彳脅／刪基因遺傳轉(zhuǎn)化體系，主要獲得了以下結(jié)果：1、以花生上胚軸為外植體，當(dāng)4．PU濃度為0．
3、1mg／L，BA濃度為4mg／L時(shí)出愈率為100％；不定芽器官發(fā)生再生途徑的適宜培養(yǎng)基分別為：叢生芽培養(yǎng)基：MS+0．1mg／L4-PU+2mg／LBA；伸長培養(yǎng)基：MS+0．1mg／L4-PU+4mg／LBA2、構(gòu)建了帶有35S啟動子、以GUS為報(bào)告基因、Ⅳ尸丁刀基因?yàn)榭剐院Y選基因、含有AhNCED』基因的過表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404。摘要3、對影響根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化主要因素的研究結(jié)果表明：預(yù)培養(yǎng)Od，菌液濃度OD600為0．8，浸染時(shí)間5-6min，GUS瞬時(shí)表達(dá)率和抗性芽發(fā)生率為100％，抗性芽數(shù)平均存活
4、最高為1．67個(gè)。基因槍轟擊法轉(zhuǎn)化花生(粵油7)愈傷組織獲得最大抗性芽率為3．2％。4、從獲得的抗性植株中隨機(jī)抽89株，經(jīng)PCR檢測陽性率為48．3％；其中50％GUS組織化學(xué)染色呈陽性。5．4株轉(zhuǎn)基因花生(地上部分)內(nèi)源ABA含量比野生型植株分別高5．94、2．66、2．40、1．20和1．40倍。本研究結(jié)果初步證實(shí)了AhNCEDl基因已整合汕油523基因組中，為進(jìn)一步認(rèn)識該基因在花生ABA合成及抗旱中的作用奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：根癌農(nóng)桿菌AhNCEDl基因轉(zhuǎn)化花生ABAⅡABSTRACTGENETICTRANSFo
5、RMATIoNoFAhⅣ徹JGENEMEDIATEDBYAgrobacteriumtumefciensINPEANUTMajoy：CellBiologyName：QINMingSupervisor：．LILingABSIRACIPeanut(ArachishypogaeaL．)isoneoftheworld’Smostimportantoilseedcrops．Conventionalbreedingmethodshavenotbeensuccessfulinproducingpest-resistantgenoty
6、pesofpeanut，duetothenarrowgermplasmbaseandlackssourcesofresistancetoseveralmajordiseases．Theplanthormoneabscisicacid(ABA)regulatestheplantadaptiveresponsetovariousenvironmentalstresses．TheendogenousABAcontentwillbeupregulatedbyactivitingbiosynthesisandinhibitin
7、gdegradationunderbioticandabioticstresses．DroughttoleranceisincreasedsignificantlybyexogenousABAtreatment．9一c括-epoxycarotenoiddioxygenase(NCED)isthekeyenzymeofABAbiosynthesisinhigherplantsandoverexpressionoftheNCEDgeneintransgenieplantsresuRedinincreasedtoleran
8、cetostresses．11lestudiesaboutNCEDgenealwaysfocusonfewerplantspeciesandtheworksonregulationofABAbiosynthesisandstresstolerancebyoverexpressingNCEDgeneinpeanutarefew．ANCEDgene
