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《根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的反義LEAFY基因?qū)霊意從镜倪z傳轉(zhuǎn)化研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)戧眭聲明、使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)虹屠承諾書學(xué)位論根癌農(nóng)桿菌介姆的反義L隊(duì)FY基因?qū)W(xué)位文題耳入懸鈴本的遺傳轉(zhuǎn)化研究級裂碩士學(xué)生學(xué)科導(dǎo)師姓名趙振利森林培育范國強(qiáng)專業(yè)姓名學(xué)位論文是否保密否如需保密，解密時(shí)間顰月日磽究生簽名：，董i集張導(dǎo)搏簽名：徽日期泌名月／o日日勢k知—6=年‘月／·日學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本人完全了解河南農(nóng)娥大學(xué)關(guān)乎保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)經(jīng)論文豹霹劇本窩電予舨本；學(xué)校有權(quán)保存提交論文豹印刷本和電予版本，并提供目錄檢索和閱覽服務(wù)，可以采用影印、縮
2、印或掃描等復(fù)鍥手段保存、匯縫學(xué)位論文。本人霹愨澎湊農(nóng)業(yè)文學(xué)可以熙不嗣方式在不冠媒體上發(fā)襲、傳播學(xué)位論文的全部成部分內(nèi)容。本人完全了解《舅毒農(nóng)爛大學(xué)知識產(chǎn)投傈護(hù)辦法》鼢蠢關(guān)裁定，在畢效離開河南農(nóng)業(yè)大學(xué)后，就在校期間從譬的科研工作發(fā)襲的所有論文，第一署名單蘊(yùn)必灣嘉農(nóng)業(yè)大學(xué)，試驗(yàn)耪辯，原始數(shù)據(jù)、孛援豹專穰等熟識產(chǎn)權(quán)均j基淫露農(nóng)業(yè)大學(xué)所有，否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。洼；鏍密擎麟文程舞密瑟逶藩予零芰捌蕊。研究生簽磊I髦≥蒸酮導(dǎo)師簽智i2囟蘿毽學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)綴名：，．日姚駱g月一日日辮S瓣多月協(xié)日IEI期：年月日致謝本論文是在導(dǎo)師范國強(qiáng)教
3、授悉心指導(dǎo)下完成的。從論文的選題、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到論文的最后完成，都傾注了導(dǎo)師的大量心血。導(dǎo)師求實(shí)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)精神、勤奮認(rèn)真地工作態(tài)度、精深博學(xué)的學(xué)識修養(yǎng)，引導(dǎo)我初探科學(xué)之曲徑，培養(yǎng)我建立求真求實(shí)的態(tài)度，使我終身受益。三年來，導(dǎo)師在我學(xué)業(yè)上嚴(yán)格要求，生活上給予無微不至的關(guān)懷和照顧。值此論文完成之際，我謹(jǐn)向?qū)熤乱宰钫\摯的謝意。衷心感謝蔣建平、劉震、茹廣欣、馮建燦、黎明、董慧英等諸位老師三年來對我的教誨。衷心感謝中心實(shí)驗(yàn)室的黃曉書、張慧琴，謝慧玲和周青云等諸位老師，在他們的熱情幫助和指導(dǎo)下本實(shí)驗(yàn)才得以順利完成。感謝崔紅老師在實(shí)驗(yàn)過
4、程中給予的指導(dǎo)。感謝研究生處老師們對我的幫助和教導(dǎo)。衷心感謝在實(shí)驗(yàn)、學(xué)習(xí)和生活中給予我很多幫助的翟曉巧副研究員、張勝、曹艷春、史俊華，學(xué)弟胡文元、曾輝、祝寶玉、靳飛、劉國志、賈峰，學(xué)妹張變莉、魏真真。衷心感謝我在本科、研究生期間林學(xué)園藝學(xué)院的老師和各位同學(xué)。衷心感謝我的家人和朋友，他們的關(guān)心、支持、理解、鼓勵(lì)、愛護(hù)和幫助是我戰(zhàn)勝一切困難的精神支柱。．最后，再次深深地感謝所有關(guān)心、支持和幫助我的領(lǐng)導(dǎo)、老師、同學(xué)和朋友們!趙振利2006年6月于鄭州根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的反義LEAFY基因?qū)А珣意從镜倪z傳轉(zhuǎn)化研究摘要懸鈴木樹干高大，
5、綠化效果好，葉片吸塵、殺菌，抗有毒氣體和病蟲害能力強(qiáng)，是世界著名的行道樹，有“行道樹之王”的美譽(yù)，因此，我國許多城市都有種植。但其果毛不僅污染環(huán)境，而且會引發(fā)呼吸系統(tǒng)及皮膚疾病，給居民的生活帶來了極大的不便。為此，國內(nèi)外學(xué)者曾進(jìn)行了大量的研究工作，以期解決果毛污染問題。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，基因工程為解決這些問題提供了新的途徑．本試驗(yàn)研究了影響根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化懸鈴木的多種因素，優(yōu)化了轉(zhuǎn)化條件，建立了懸鈴木遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)；篩選出了適宜懸鈴木組培苗葉片DNA的提取方法：利用GUS報(bào)告基因和PCR技術(shù)檢測了外源基因在轉(zhuǎn)化植株中的表達(dá)
6、，為遺傳轉(zhuǎn)化結(jié)果提供了分子生物學(xué)證據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1．制備了轉(zhuǎn)化懸鈴木的工程農(nóng)桿菌。表達(dá)載體pBll21中整合了反義LEAFY基因，在反義LEAFY基因上有一Hindlll酶切位點(diǎn)。通過堿裂解法提取質(zhì)粒DNA，用Hindlll和EcoRI對其進(jìn)行酶切，切出了預(yù)期大小的DNA片段。將此質(zhì)粒用凍融法導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404。PCR擴(kuò)增顯示反義LEAFY基因轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌中。2．Ka和Cef等抗生素對懸鈴木外植體再生的影響存在一定的差異。在幼芽生根和葉片分化培養(yǎng)基中分別加入質(zhì)量濃度為15mg·L-l和40mg·L．1Ka，根
7、和葉片愈傷組織、幼芽的誘導(dǎo)率均為O；在分化和生根培養(yǎng)基中分別加入質(zhì)量濃度為500mg·L．1和800mg·L-l的Cef則可使愈傷組織、幼芽和根的誘導(dǎo)率為0。在葉片分化培養(yǎng)基中同時(shí)加入這2種抗生素，愈傷組織和幼芽誘導(dǎo)率為0的Ka+Cef組合的質(zhì)量濃度為30mg·L-1+400mg·L．1。3．優(yōu)化了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)懸鈴木的遺傳轉(zhuǎn)化體系。預(yù)培養(yǎng)9d的懸鈴木葉片在OD600值為0．7的根癌農(nóng)桿菌菌液中浸染10rain后，再在含有100pmol·L．1的乙酰丁香酮的共培養(yǎng)培養(yǎng)基上黑暗條件下共培養(yǎng)3d葉片的遺傳轉(zhuǎn)化效率最高。該體系
8、的建立為進(jìn)行農(nóng)桿菌介導(dǎo)外源目的基因培養(yǎng)懸鈴木新品種奠定了基礎(chǔ)。4．篩選出了懸鈴木遺傳轉(zhuǎn)化過程中抑制愈傷組織褐化的物質(zhì)及其質(zhì)量濃度。在D11、PVP和AC3種物質(zhì)中以0．08mg·L．1的DTl’抑制褐化最有效，褐化率為1904：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O．1％的AC次之，褐化率為27％；質(zhì)量濃度為2000mg·L4的PVP褐化率最
