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《根癌農桿菌介導的反義LEAFY基因導入懸鈴木的遺傳轉化研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、河南農業(yè)大學學位論文獨戧眭聲明、使用授權及知識產權虹屠承諾書學位論根癌農桿菌介姆的反義L隊FY基因導學位文題耳入懸鈴本的遺傳轉化研究級裂碩士學生學科導師姓名趙振利森林培育范國強專業(yè)姓名學位論文是否保密否如需保密，解密時間顰月日磽究生簽名：，董i集張導搏簽名：徽日期泌名月／o日日勢k知—6=年‘月／·日學位論文使用授權及知識產權歸屬承諾本人完全了解河南農娥大學關乎保存、使用學位論文的規(guī)定，即學生必須按照學校要求提交學經論文豹霹劇本窩電予舨本；學校有權保存提交論文豹印刷本和電予版本，并提供目錄檢索和閱覽服務，可以采用影印、縮
2、印或掃描等復鍥手段保存、匯縫學位論文。本人霹愨澎湊農業(yè)文學可以熙不嗣方式在不冠媒體上發(fā)襲、傳播學位論文的全部成部分內容。本人完全了解《舅毒農爛大學知識產投傈護辦法》鼢蠢關裁定，在畢效離開河南農業(yè)大學后，就在校期間從譬的科研工作發(fā)襲的所有論文，第一署名單蘊必灣嘉農業(yè)大學，試驗耪辯，原始數(shù)據(jù)、孛援豹專穰等熟識產權均j基淫露農業(yè)大學所有，否則，承擔相應的法律責任。洼；鏍密擎麟文程舞密瑟逶藩予零芰捌蕊。研究生簽磊I髦≥蒸酮導師簽智i2囟蘿毽學院領導綴名：，．日姚駱g月一日日辮S瓣多月協(xié)日IEI期：年月日致謝本論文是在導師范國強教
3、授悉心指導下完成的。從論文的選題、實驗設計到論文的最后完成，都傾注了導師的大量心血。導師求實嚴謹?shù)目茖W精神、勤奮認真地工作態(tài)度、精深博學的學識修養(yǎng)，引導我初探科學之曲徑，培養(yǎng)我建立求真求實的態(tài)度，使我終身受益。三年來，導師在我學業(yè)上嚴格要求，生活上給予無微不至的關懷和照顧。值此論文完成之際，我謹向導師致以最誠摯的謝意。衷心感謝蔣建平、劉震、茹廣欣、馮建燦、黎明、董慧英等諸位老師三年來對我的教誨。衷心感謝中心實驗室的黃曉書、張慧琴，謝慧玲和周青云等諸位老師，在他們的熱情幫助和指導下本實驗才得以順利完成。感謝崔紅老師在實驗過
4、程中給予的指導。感謝研究生處老師們對我的幫助和教導。衷心感謝在實驗、學習和生活中給予我很多幫助的翟曉巧副研究員、張勝、曹艷春、史俊華，學弟胡文元、曾輝、祝寶玉、靳飛、劉國志、賈峰，學妹張變莉、魏真真。衷心感謝我在本科、研究生期間林學園藝學院的老師和各位同學。衷心感謝我的家人和朋友，他們的關心、支持、理解、鼓勵、愛護和幫助是我戰(zhàn)勝一切困難的精神支柱。．最后，再次深深地感謝所有關心、支持和幫助我的領導、老師、同學和朋友們!趙振利2006年6月于鄭州根癌農桿菌介導的反義LEAFY基因導～懸鈴木的遺傳轉化研究摘要懸鈴木樹干高大，
5、綠化效果好，葉片吸塵、殺菌，抗有毒氣體和病蟲害能力強，是世界著名的行道樹，有“行道樹之王”的美譽，因此，我國許多城市都有種植。但其果毛不僅污染環(huán)境，而且會引發(fā)呼吸系統(tǒng)及皮膚疾病，給居民的生活帶來了極大的不便。為此，國內外學者曾進行了大量的研究工作，以期解決果毛污染問題。隨著科學技術的發(fā)展，基因工程為解決這些問題提供了新的途徑．本試驗研究了影響根癌農桿菌轉化懸鈴木的多種因素，優(yōu)化了轉化條件，建立了懸鈴木遺傳轉化系統(tǒng)；篩選出了適宜懸鈴木組培苗葉片DNA的提取方法：利用GUS報告基因和PCR技術檢測了外源基因在轉化植株中的表達
6、，為遺傳轉化結果提供了分子生物學證據(jù)。實驗結果如下：1．制備了轉化懸鈴木的工程農桿菌。表達載體pBll21中整合了反義LEAFY基因，在反義LEAFY基因上有一Hindlll酶切位點。通過堿裂解法提取質粒DNA，用Hindlll和EcoRI對其進行酶切，切出了預期大小的DNA片段。將此質粒用凍融法導入根癌農桿菌LBA4404。PCR擴增顯示反義LEAFY基因轉入農桿菌中。2．Ka和Cef等抗生素對懸鈴木外植體再生的影響存在一定的差異。在幼芽生根和葉片分化培養(yǎng)基中分別加入質量濃度為15mg·L-l和40mg·L．1Ka，根
7、和葉片愈傷組織、幼芽的誘導率均為O；在分化和生根培養(yǎng)基中分別加入質量濃度為500mg·L．1和800mg·L-l的Cef則可使愈傷組織、幼芽和根的誘導率為0。在葉片分化培養(yǎng)基中同時加入這2種抗生素，愈傷組織和幼芽誘導率為0的Ka+Cef組合的質量濃度為30mg·L-1+400mg·L．1。3．優(yōu)化了根癌農桿菌介導懸鈴木的遺傳轉化體系。預培養(yǎng)9d的懸鈴木葉片在OD600值為0．7的根癌農桿菌菌液中浸染10rain后，再在含有100pmol·L．1的乙酰丁香酮的共培養(yǎng)培養(yǎng)基上黑暗條件下共培養(yǎng)3d葉片的遺傳轉化效率最高。該體系
8、的建立為進行農桿菌介導外源目的基因培養(yǎng)懸鈴木新品種奠定了基礎。4．篩選出了懸鈴木遺傳轉化過程中抑制愈傷組織褐化的物質及其質量濃度。在D11、PVP和AC3種物質中以0．08mg·L．1的DTl’抑制褐化最有效，褐化率為1904：質量分數(shù)為O．1％的AC次之，褐化率為27％；質量濃度為2000mg·L4的PVP褐化率最
