皮膚腫瘤治療論文

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1、皮膚腫瘤治療論文皮膚腫瘤治療論文預(yù)讀：摘要:1材料和方法1.1材料石蠟包埋組織標(biāo)本選自西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院199901/200605病理確診手術(shù)患者.SCC45例，年齡45?95（平均68.8）歲,男27例，女18例.Bowen病19例，年齡45?87（平均65.2）歲，男12例，女7例.正常人皮膚10例對(duì)照，年齡46?78（平均62.5）歲，男5例，女5例作鼠抗人MMP9mAb（MAB0245）和CD34mAb（（MAB0034）,免疫組化SP試劑盒（KIT9710）及DAB試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司.1.2方法所有組織均經(jīng)40g/L甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋切片，連

2、續(xù)切片5張，厚約4屮n.采用SP法，免疫組化染色程序按試劑盒說明書進(jìn)行.陽性對(duì)照采用自身對(duì)照，用PBS代替一抗和二抗進(jìn)行陰性對(duì)照.MMP9和CD34均采用高溫高壓抗原修復(fù).MMP9結(jié)果判定:在不知任何背景資料的情形下，采用雙盲法進(jìn)行判定，以腫瘤細(xì)胞膜和/或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)淡棕黃色顆粒為陽性，并按著色強(qiáng)弱分級(jí):無色為0,淺黃色為1,深黃色為2,棕黃色為3；著色范圍以在10x40高倍鏡下隨機(jī)選區(qū)5個(gè)視野（每個(gè)視野記數(shù)100個(gè)細(xì)胞）計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)均值:<25%為1,25%?49%為2,50%為3.上述兩項(xiàng)相加為MMP9的表達(dá)強(qiáng)度積分:<2為陰性,V3為弱陽性（+）,3?4為陽性（），

3、>4為強(qiáng)陽性（）.MVD計(jì)數(shù)參照文獻(xiàn)［3-4］方法進(jìn)行微血管計(jì)數(shù),先在低倍鏡（MOO）下觀察確定血管密度最高處，在&200）視野下選擇3個(gè)高血管密度區(qū),計(jì)算單位視野（x200）平均血管數(shù).單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇，均作為一個(gè)血管計(jì)數(shù),而直徑大于約8個(gè)紅細(xì)胞的血管,有較厚肌層的血管以及硬化區(qū)的血管不在計(jì)數(shù)范圍內(nèi).統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:釆用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理，根據(jù)資料類型組間比較分別采用方差分析和%2檢驗(yàn),P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.2結(jié)果2」MMP9MMP9陽性改變?yōu)榧?xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜呈棕黃色，偶爾可見細(xì)胞核著色,陽性顆粒多呈團(tuán)塊狀.正常人皮膚組織中MMP9呈弱陽性表達(dá)，主要

4、表達(dá)于顆粒層和棘細(xì)胞層，真皮層中纖維樣細(xì)胞、單一核細(xì)胞等見陽性染色.BD組織中表皮全層均冇MMP9均勻彌漫表達(dá).SCC中MMP9在癌巢組織彌漫分布，以腫瘤周邊表達(dá)強(qiáng)烈（圖1）MMP9表達(dá)在?正常皮膚組、Bowen病組、SCC組依次增高（表1）.MMP9在SCC組中高于Bowen病組織（%2=6.667,P<0.05）,Bowen病組中MMP9高于正常皮膚組（P=0.028,P&It;0.05）.在SCC組中MMP9的表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤組織的病理分級(jí)均無關(guān)（P>0.05）.表1MMP9在正常皮扶組、Bowen病組和SCC表達(dá)（略）2.2MVD計(jì)數(shù)CD34標(biāo)記的微血管呈

5、點(diǎn)狀分布,血管內(nèi)皮細(xì)胞膜被染成褐色.在SCC組織中微血管形態(tài)不規(guī)則，部分?血管呈現(xiàn)發(fā)芽狀，血管分布不均勻，在SCC的邊緣區(qū)域最為密集，呈簇狀（圖2）.Bowcn病組織中微血管形態(tài)較規(guī)則，但分布不均，血管簇偶見.正常皮膚組織內(nèi)的微血管形態(tài)規(guī)則，分布均勻.Bowen病組中和SCC組中MVD明顯升高（表3）?圖1SCC組織MMP9表達(dá)SPx400（略）表2SCC組織MMP9表達(dá)與患者年齡、性別及鱗癌分期的關(guān)系（略）圖2SCC組織MVD計(jì)數(shù)SPxlOO（略）表3CD34和MVD在Bowen病和SCC中表達(dá)（略）aP<0.05vs正常皮膚.3討論本研究結(jié)果顯示,MMP9在SCC組中高于

6、Bowen病組織（P<0.05）,Bowen病組中MMP9高于止常皮膚組（P<0.05）.Bowen病MMP9在增生表皮細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核表達(dá)；在SCC組織中MMP9在腫瘤細(xì)胞，增生上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞均有陽性表達(dá)，在表達(dá)的強(qiáng)度、陽性細(xì)胞的種類、數(shù)量上均高于Bowen病組，提示MMP9高表達(dá)可能是SCC轉(zhuǎn)移、侵襲能力的分子基礎(chǔ).同時(shí)觀察到僅有部分有腫瘤細(xì)胞能表達(dá)MMP9,且表達(dá)MMP9的腫瘤細(xì)胞多位于癌巢的外周部分和毛細(xì)血管、淋巴管管腔周圍，提示MMP9表達(dá)的腫瘤細(xì)胞可能具有更強(qiáng)的侵襲能力.實(shí)體腫瘤的新生血管提供了更多與體循環(huán)連接的通路，這使腫瘤細(xì)胞更容易從原發(fā)灶向遠(yuǎn)隔部位轉(zhuǎn)

7、移?腫瘤組織屮微血管密度越大，腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血循環(huán)及淋巴循環(huán)的機(jī)會(huì)越多,淋巴結(jié)及鄰近臟器轉(zhuǎn)移的機(jī)會(huì)也增大.在許多腫瘤中都發(fā)現(xiàn):微血管密度與腫瘤侵襲性與腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生率相關(guān)[1,5-6].近來研究表明,MMP9不僅是降解基底膜和ECM的關(guān)鍵酶，而且在腫瘤間質(zhì)血管生成中起重要作用[1,5].Wang等[7]人的研究表明，存在于細(xì)胞外基質(zhì)的VEGF能夠通過存在于血管平滑肌細(xì)胞上的VEGFR1受體調(diào)節(jié)MMPs的表達(dá).而MMPs又能降解細(xì)胞外基質(zhì)釋放更多的VEGF,這便建立了一個(gè)