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《根癌農(nóng)桿菌介導的赭曲霉遺傳轉化體系的建立-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在應用文檔-天天文庫。
1、生物技術通報·研究報告·BIoTECHNoLoGYBULLETIN2014年第6期根癌農(nóng)桿菌介導的赭曲霉遺傳轉化體系的建立崔倩李潔劉曉光(天津市工業(yè)微生物重點實驗室工業(yè)發(fā)酵微生物教育部重點實驗室天津科技大學生物工程學院天津300457)摘要：赭曲霉在工業(yè)上用于甾體C．1la羥基化。為了對現(xiàn)有赭曲霉生產(chǎn)茵株進行遺傳改造，以農(nóng)桿菌LBA4404作為侵染菌株，以赭曲霉(TCCC41060)作為受體菌株，以潮霉素B基因作為篩選標記，成功建立了根癌農(nóng)桿菌介導的赭曲霉遺傳轉化體系并對其轉化效率的主要影響因素，如農(nóng)桿菌濃度、孢子濃度、共培養(yǎng)時間和溫度等進行了分析。在最佳條件下，轉化效
2、率可以達到57個轉化子／l個分生孢子。隨機挑選的8個陽性轉化子lO代連續(xù)培養(yǎng)結果表明所獲得的轉化子能穩(wěn)定遺傳。該遺傳轉化體系的建立為赭曲霉菌株的定向遺傳改造提供了重要的操作平臺。關鍵詞：赭曲霉根癌農(nóng)桿菌轉化體系EstablishmentofAgrobacteriumtumefaciens—mediatedTransformationSystemofAspergillusochraceusCuiQianLiJieLiuXiaoguang(n口nnKeyLaboratoryofIndustrialMicrobiology，KeyLaboratoryofIndustrialF
3、ermentationMicrobiologyMin~tryofEducmion，theCollegeoJ’Biotechnology，TianjinUniversityofScience&Technology，Tianjin300457)Abstract：FilamentousfungusAspergillusochFacel~TCCC41060isanindustrialstrainusedformicrobialsteroidC11-ahydroxylation．InordertocreategenetictoolsforA．ochraceus，thetransf
4、ormationsystemofA．ochraceuswasestablishedusingAgrobacteriumtumefaciens-mediatedsystem(ATMT)．A．tumefaciensLBA4404wasusedastheinfectivestrainandhygromycinBgeneastheselectionmarker．ThemajorfactorsafectingthetransformationefficiencyincludingtheconcentrationsofA．tumefacienscellandA．ochraceta~
5、spores，co-culturetime，andCO-culturetemperaturewereinvestigated．Underthebestconditions，thetransformationeficiencyof57transformants／107sporesWasobtained．A．ochraceustransfonnantswereconfirmedbyPCRamplification．Randomlyselected8transformantswereshowntobegeneticallystableafter10roundsofsucces
6、sivecultivation．ResultsindicatedthisATMTtransformationsystemwouldprovideimportantmeansforthedirectedgeneticmanipulationofthisimportantindustrialstrainA．ochraceusTCCC41060．Keywords：Aergf2ochraceusAgrobacteriumtumefaciensTransformantionsystem赭曲霉(Aspergillusochraceus)，屬于殼霉目，赭曲霉中合成赭曲霉毒素A的pb基
7、因J。本研究杯霉科，在自然界中分布廣泛。目前工業(yè)上主要應意在建立一個高效的赭曲霉遺傳轉化體系，從而為用赭曲霉進行甾體類藥物的C一1la羥基化反應，如生產(chǎn)菌株的定向遺傳改造奠定基礎。制備心血管藥物C．1la羥基化坎利酮?。若要進一目前已報道的絲狀真菌的DNA轉化方法主要有步提高赭曲霉對甾體類藥物的催化效率，需要從發(fā)CaClJPEG轉化法J、電擊轉化法'、基因槍酵條件優(yōu)化和菌株改造兩個方面進行研究。到目前轉化法_3’、限制性內(nèi)切酶介導的轉化法"'、農(nóng)為止，有關赭曲霉催化甾體類藥物發(fā)酵條件優(yōu)化的桿菌介導轉化法(Agrobacteriumtume
