禽流感病毒LAMP快速診斷方法的建立-論文.pdf

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1、浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)ActaAgriculturaeZhefiangensis,2014,26(3):576—580http://www.zjnyxbCn王辰雨,胡敬東,史玉穎,等.禽流感病毒LAMP快速診斷方法的建立[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2014,26(3):576.580.DOI:10.3969/j.issn.1004-1524.2014.03.07禽流感病毒LAMP快速診斷方法的建立王辰雨,胡敬東,史玉穎,宋敏訓(xùn),,張鶴曉,(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院泰安271000;山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所濟(jì)南250023;北京檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心

2、北京100026)摘要:參考禽流感病毒(AIV)基質(zhì)蛋白(M)基因設(shè)計(jì)了兩對(duì)引物,特異性識(shí)別其6個(gè)不同位點(diǎn),建立了基于顏色判定的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)(LAMP)方法。試驗(yàn)對(duì)不同禽源病毒進(jìn)行了測(cè)試,結(jié)果發(fā)現(xiàn)該方法僅特異性地檢出禽流感病毒(H9和H5亞型)核酸,對(duì)AIV病毒的檢測(cè)極限為10EID人工感染病料檢測(cè)結(jié)果與雞胚病毒分離法的符合率為96.7%。數(shù)據(jù)表明,建立的LAMP方法特異、敏感、簡(jiǎn)便,在禽流感的診斷中具有很大的臨床應(yīng)用潛力。關(guān)鍵詞:禽流感病毒;基質(zhì)蛋白基因;環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)中圖分類號(hào):S851.347.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章

3、編號(hào):1004—1524(2014)03—0576-05Establishmentofrapidloop-mediatedisothermalamplificationmethodfordetectionofavianinfluenzavirusWANGChen.yu,HUJing—dong,SHIYu.ying,SONGMin.xun',ZHANGHe.xiao,(ShandongAgriculturalUniversity,Taian271000,China;InstituteofPoultryScience,Shandong

4、AcademyofAgriculturalScience,n0n250023,China;BeifngInspectionandQuarantineTestingCenter,Beijing100026,China)‘Abstract:WithreferencetOthematrixproteingeneofAvianInfluenzaVirus(AIV),wedesignedtwopairsofprimerstospecificallyrecognizeitssixdifferentsites,andestablishedthe

5、Loop—mediatedIsothermalAmplificationReaction(LAMP)methodbasedonthedeterminedcolor.Withdifferentavianvirusestested,theresultsshowedthatthemethodonlyspecificallydetectedAIV(H9andH5subtype)nucleicacids,andthedetectionlimitforAIVwas10EID50.Wealsodetectedthesamplesforartif

6、icialinfectionsanddiscoveredthatthecoincidencerateofLAMPtothevirusisolationwas96.7%,Theexperimentaldatademonstratedthattheestablishedmethodswerespecific.sensitive,andsimple,whichhadgreatpotentialforclinicalapplication.Keywords:avianinfluenzavirus;matrixproteingene;loo

7、p—mediatedisothermalamplification禽流感的臨床癥狀和病理變化因感染禽的等不同而表現(xiàn)不同¨J。因此禽流感診斷必須依種類、年齡、病程長(zhǎng)短、并發(fā)感染及感染毒株毒力賴于病原鑒定、血清學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)等。病毒分離、RT—PCR及熒光定量RT.PCR方法相繼收稿日期:20131l-19用于禽流感病毒的檢測(cè),但這些方法均因確診時(shí)基金項(xiàng)目:“山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目資助”,質(zhì)檢公間過(guò)長(zhǎng)、儀器設(shè)備要求高等,很難滿足快速、簡(jiǎn)益性行業(yè)科研專項(xiàng)(201010067)作者簡(jiǎn)介:王辰雨(1988一),男,山東省濟(jì)南市人

8、,碩士研究生,便、經(jīng)濟(jì)的臨床需求J。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)研究方向?yàn)閯?dòng)物傳染病。E—mail:milan8804@163.con(1oop-mediatedisothermalamplification,LAMP)技$通訊作者,宋敏訓(xùn),E-mail:m

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