康腦靈膠囊抗癡呆大鼠自由基損傷的作用機制研究論文

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1、康腦靈膠囊抗癡呆大鼠自由基損傷的作用機制研究論文.freelodeletrytodetectcontentsofSOD,MDAandNO,.freeletertodetecttheexpressionofcaspase-3,spectrophotometricmethodtodetecttheexpressionofBcl-2aftertraditionalChinesemedicineinterference.ResultsKangnaolingcapsulecanmarkedlyreducetheconten

2、tsofMDA,raisecontentsofSODandNO,degradetheexpressionofcaspase-3,enhancetheexpressionofBcl-2.ConclusionsKangnaolingcapsulecanmarkedlyprotectVDratfromfreeradicalinjury,entia；freeradicalinjury；Bcl-2；caspase-3；rat康腦靈膠囊由川芎、當歸、銀杏葉,淫羊藿等組成,功能活血化瘀、補腎益智,用于血管性癡呆的治療1。研究表

3、明,其能明顯提高癡呆模型動物學(xué)習記憶能力,改善與學(xué)習記憶相關(guān)蛋白乙酰膽堿酯酶、神經(jīng)生長因子的表達2。本研究對其抗缺血再灌注所致癡呆大鼠自由基損傷的保護作用及對凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2、caspase-3表達的影響進行探討,現(xiàn)報道如下。1實驗材料1.1動物清潔級純系DA)、一氧化氮(NO)測定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供,批號：SOD、MDA為20041028,NO為20041030。FACSCaliber流式細胞儀,美國BD公司；BECKMAN-700全自動生化分析儀,美國貝克曼；RF-540型熒光分光光度

4、計,日本島津。2實驗方法2.1造模、分組與給藥參照改良的四血管夾閉法制備大鼠腦缺血再灌注模型3。10%水合氯醛3mL/kg(體重)腹腔麻醉,取仰臥位,頸部正中切口,分離雙側(cè)頸總動脈,穿線備用,用微型動脈夾關(guān)閉雙側(cè)頸總動脈10min,再通10min,反復(fù)3次,撤線,縫合。隨機分為正常對照組(A組)、模型組(B組)、腦復(fù)康對照組(C組)及康腦靈高(D組)、低(E組)劑量組。每組10只動物。A、B組予生理鹽水灌胃,每日1次；C組給藥量為0.28g/kg；D組給藥量為2.10g/kg；E組給藥量為1.05g/kg。灌胃給

5、藥,每日1次,連續(xù)14d。第15日大鼠斷頭處死,制備腦組織勻漿液及單細胞懸液備用。2.2分光光度法檢測SOD、MDA、NO各組大鼠斷頭后迅速制備腦組織勻漿液,用考馬斯亮蘭法蛋白定量后,按試劑盒說明書操作,測SOD、MDA、NO的吸光度值。2.3流式細胞儀檢測Bcl-2的表達各組大鼠斷頭后迅速取腦組織海馬區(qū),制備單細胞懸液,調(diào)整細胞數(shù)1×106/mL。按細胞內(nèi)蛋白染色方法,加入20μLBcl-2抗體,染色30min,流式細胞儀檢測Bcl-2蛋白表達的熒光值。2.4熒光分光光度計檢測caspase-3的表達細胞懸液的

6、制備同“2.1”項。按試劑盒說明書操作,熒光分光光度計測caspase-3熒光值。2.5統(tǒng)計學(xué)方法用SAS軟件單因素方差分析進行處理,計量資料以x±s表示。3結(jié)果(見表1、表2)表1康腦靈膠囊對癡呆大鼠腦組織勻漿中MDA、SOD、NO含量的影響(略)注：與A組比較,*P0.05,**P0.01；與B組比較,△P0.05(下同)。表2康腦靈膠囊對癡呆大鼠神經(jīng)細胞caspase-3、Bcl-2（略）注：與C組比較,▲P0.01。4討論血管性癡呆是多種因素參與的復(fù)雜病理過程,缺血再灌注損傷癡呆模型中自由基損傷有重要意義

7、,氧自由基引起的組織脂質(zhì)過氧化損傷是其重要原因4。缺血再灌注損傷后可產(chǎn)生高濃度活性氧(ROS),包括超氧陰離子自由基(O2·)和NO等,氧自由基可損傷DNA,進而和其它機制一起最終導(dǎo)致細胞凋亡5－6。細胞凋亡是caspase家族參與的復(fù)雜過程,NO及其類似物可通過改變線粒體膜的通透性,導(dǎo)致一系列caspase家族酶系的活化,從而導(dǎo)致細胞凋亡7。Bcl-2基因是細胞凋亡的重要抑制基因,過高表達可防止或降低各種刺激如自由基、細胞因子等引起的細胞凋亡,其機理是通過抑制活性氧自由基的脂質(zhì)過氧化作用而發(fā)揮抗凋亡活性8。有研

8、究表明,補腎活血類中藥具有清除自由基的作用9。本實驗結(jié)果表明,康腦靈膠囊能顯著降低模型動物腦組織中MDA含量,提高SOD、NO含量,SOD是機體清除自由基的重要酶類,通過清除多余自由基而保證人體代謝平衡10?？的X靈膠囊還可增強缺血再灌注損傷后Bcl-2的表達,降低caspase-3的表達。說明康腦靈膠囊具有抗氧化作用,可抵抗缺血再灌注后自由基大量產(chǎn)生,腦組織受氧自由基的損