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《17β-雌二醇對氧糖剝奪再灌注損傷的pc12神經(jīng)細(xì)胞的保護作用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、170-雌二醇對氧糖剝奪再灌注損傷的PC12神經(jīng)細(xì)胞的保護作用李東峰1高虹1周文科2（1南陽市屮心醫(yī)院河南南陽473000;2新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院河南衛(wèi)輝453100）【屮圖分類號】R969【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1672-5085（2012）49-0037-02【摘要】目的研究17β-雌二醇對氧糖剝奪再灌注損傷的PC12祌經(jīng)細(xì)胞的作用。方法將PC12神經(jīng)細(xì)胞隨機分為三組：正常對照組；OGD-R（oxygen-glucosedeprivationandreperfusion）組和17β-E2（17β■雌二醇）治療組。OGD-R
2、組和17β-E2治療組進行氧糖剝奪再灌注，觀察氧糖剝奪后PC12神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)改變；流式細(xì)胞儀檢測再灌注24h后PC12神經(jīng)細(xì)胞早期凋亡率和死亡率。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x-±s）表示，應(yīng)用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析，顯著性水準(zhǔn)為α=0.05。結(jié)果（1）氧糖剝奪30min后17β-E2治療組較OGD-R模型組PC12神經(jīng)細(xì)胞胞體水腫輕，保留丫突起，但較正常細(xì)胞明顯變短其至消失。（2）流式細(xì)胞儀檢測示再灌注24小時后早期凋亡率和死亡率屮17β-E2治療組均介于正常對照組和OGD-R組之間，
3、三組間兩兩比較均有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論17β-雌二醇對氧糖剝奪再灌注損傷的PC12神經(jīng)細(xì)胞有保護作用?！娟P(guān)鍵詞】雌激素PC12細(xì)胞神經(jīng)元氧糖剝奪NGF流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)前女性的腦卒屮的發(fā)病率明顯低于男性，但絕經(jīng)后其發(fā)生率達(dá)到男性的發(fā)病率，使人們認(rèn)識到雌激素可能有神經(jīng)保護作用。目前已經(jīng)進行丫大量的動物實驗和臨床研究顯示：外源性17β-雌二醇可明顯減輕腦損傷后的腦水腫，促進認(rèn)知功能的恢復(fù)，抑制遲發(fā)性神經(jīng)元死亡。A前這些研究僅建立在動物模型上，受到腦內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞、炎癥細(xì)胞等因素影響較人，研究結(jié)果存在很大爭議。本實驗采用國內(nèi)外經(jīng)典的模擬體內(nèi)缺血再
4、灌注的細(xì)胞氧糖剝奪再灌注損傷模型［1］，以PC12神經(jīng)細(xì)胞為對象研究雌激素對神經(jīng)細(xì)胞的作用。1材料和方法1.1主要試劑和儀器PC12細(xì)胞（上海中科院典型細(xì)胞培養(yǎng)庫）;NerveGrowthFactor（NGF2.5S）（美國Invitrogen公司）；倒置顯微鏡（日本Nikon公司）；細(xì)胞缺氧裝置（自制）；17β-雌二醇（美國Sigma公司）；DMEM培養(yǎng)基（無糖，無酸紅）（美國Sigma公司）；ArwexinV-FITC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（碧云天生物技術(shù)研究所）。1.2試驗方法1.2.1PC12細(xì)胞的培養(yǎng)傳代PC12細(xì)胞用高糖DMEM培養(yǎng)基在37°C
5、5%C02及飽和濕度的條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)3?5天后傳代。以l×106個細(xì)胞/ml的密度進行傳代培養(yǎng)，即為PC12細(xì)胞2代。1.2.2NGF對PC12細(xì)胞的誘導(dǎo)分化［2］用含50ng/mlNGF（2.5s）的預(yù)熱高糖DMEM培養(yǎng)基對l×106個細(xì)胞/mlPC12細(xì)胞進行傳代培養(yǎng)5天，胞體變成梭形，兩極長出較長的突起，呈神經(jīng)元特征稱為PC12神經(jīng)細(xì)胞，按實驗需要密度將PC12神經(jīng)細(xì)胞接種于培養(yǎng)板中，再誘導(dǎo)分化48h,選取PC12神經(jīng)細(xì)胞貼壁良好，誘導(dǎo)分化一致的培養(yǎng)孔進行隨機分組。1.2.3實驗分組及處理實驗分組及試驗過程處理如下表。實驗分組氧糖
6、剝奪期（30min）再灌注期（24h）正常對照組更換為高糖DMEM培養(yǎng)基，不放入缺氧倉進行缺氧。更換為高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。OGD-R模型組更換無糖DMEM培養(yǎng)基，放入缺氧倉進行缺氧。更換為高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。17β-E2治療組更換10nmol/L17β-E2無糖DMEM培養(yǎng)基，放入缺氧倉進行缺氧。更換為10nmol/L17β-E2高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。1.2.4PC12神經(jīng)細(xì)胞氧糖剝奪再灌注[3]OGD-R組和17β-E2治療組在氧糖剝奪期分別更換為預(yù)熱的無糖DMEM培養(yǎng)基和10nmol/L17β-E2
7、無糖DMEM培養(yǎng)基，去培養(yǎng)板蓋，放入自制密閉的溫度保持在(37±0.5fC的從入U持續(xù)充入缺氧混合氣體(含95%N2,5%CO2),出口接入水密封瓶的3升缺氧倉中進行缺氧處理。缺氧氣體由缺氧倉頂部進入，由底部排出，初以lOL/min,6min后缺氧倉內(nèi)02濃度降至1%以下，再以lL/min持續(xù)充入缺氧混合氣體，并開始計吋缺氧30min，取出培養(yǎng)板，分別更換為預(yù)熱的高糖DMEM培養(yǎng)基和10nmol/L17β-E2高糖DMEM培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。根據(jù)實驗設(shè)計檢測以下試驗指標(biāo)。1.2.5觀察氧糖剝奪30min后PC12神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)
8、將以106個細(xì)胞/ml接
