hplc測定人血漿中紫杉醇濃度

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1、HPLC測定人血漿中紫杉醇濃度中國色譜網(wǎng)(2010-7-2014:12:04)???????摘要　　目的：建立人血漿中紫杉醇HPLC測定法，為人體內(nèi)藥代動力學(xué)研究和藥效學(xué)評價提供方法學(xué)基礎(chǔ)?！　》椒ǎ喝⊙獫{300μl，以地西泮為內(nèi)標(biāo)，采用有機相(叔丁基甲醚)兩步提取。常溫下氮氣吹干，殘渣用移動相溶解，進(jìn)樣20μl。色譜條件：Shim-PackCLC-ODS柱；流動相：甲醇-乙腈-水(25∶40∶39)；流速為1.2ml*min-1，檢測波長227nm?！　〗Y(jié)果：本法在0.03～5.00mg*L-1間線性良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9999(n=7)。高中

2、低濃度的3個質(zhì)控樣品日間內(nèi)變異性RSD都在2.31%～4.90%之間，回收率在97.4%～103.3%之間，血漿最低檢測濃度為0.008mg*L-1。　　結(jié)論：本方法能簡便、準(zhǔn)確地測出血漿中微量藥物的含量，適于研究需要?！　∽仙即急蛔u為90年代抗腫瘤藥三大成就之一，對鉑耐藥的卵巢癌療效較好，作為應(yīng)用于臨床的新型藥物，它既是婦科卵巢癌、乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌的一線用藥，也是腫瘤晚期仍行之有效的化療藥物，臨床上對其給藥方案和劑量確定有許多不同的觀點，仍需借助藥-時數(shù)據(jù)進(jìn)行客觀的評價。低濃度紫杉醇測定一直是困擾研究的大問題。國外文獻(xiàn)報道的固相提取和預(yù)柱分離

3、過程需要較高的成本，技術(shù)要求復(fù)雜，因而限制了對紫杉醇的研究。我們建立了測定人血漿中紫杉醇的HPLC法，取樣量小，靈敏度高，快速簡便。為確定合理的治療方案和治療劑量，以及藥代動力學(xué)分析和藥效學(xué)評價提供了方法學(xué)基礎(chǔ)?！　?、材料與方法　　1.1儀器與色譜條件　　美國Warters-M510泵和U6K進(jìn)樣閥；日本島津SPD-2AS型可變波長紫外檢測器和C-R2AX數(shù)據(jù)處理機；100μlHamilton進(jìn)樣器(美國)；液體混合器(UpwardsBiosystemsLtd.，臺灣)；LG15-W高速微量離心混合器(上海)；PING-PONG臥式振蕩器(Blo

4、ckScientific，德國)；Milipore超純水系統(tǒng)(法國)。Shim-PackCLC-ODS柱(6.0mm×150mm)，流動相：甲醇-乙腈-水(25∶40∶39)，流速為1.2ml.min-1，檢測波長為227nm，紙速2mm.min-1，室溫下操作，檢測靈敏度0.0005AUFS?！　?.2藥品與試劑　　紫杉醇對照品(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所)；地西泮對照品(北京市藥品檢驗所)；叔丁基甲醚(瑞士FlukaChemicAG)，甲醇和乙腈(北京昌化精細(xì)化工廠，色譜純)；水為實驗用超純水。　　1.3儲備液　　紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品適量制成200mg.

5、L-1的溶液(甲醇-水=4∶1)，4～10℃儲存?zhèn)溆?，?周配一次。地西泮水溶液(1.2mg.L-1)作為內(nèi)標(biāo)。　　1.4樣品處理　　1.4.1血漿樣本精密吸取待測血漿300μl置于1.5ml具塞塑料離心試管中，先后加入20μl1.2mg.L-1內(nèi)標(biāo)和1ml叔丁基甲醚，于臥式振蕩器上混合3min后，3000×g離心3min，將800μl上清液移至另一1.5ml的具塞塑料試管中。用800μl叔丁基甲醚，重復(fù)上述操作合并上清液，氮氣吹干，溶于120μl流動相中，吸取20μl進(jìn)樣?！　?.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備用空白血漿分別配制濃度為0.03，0.10，0

6、.50，1.00，2.00，3.00，5.00mg.L-1的紫杉醇血漿標(biāo)準(zhǔn)系列。其余操作同血漿樣本處理過程。以紫杉醇濃度c為橫坐標(biāo)，紫杉醇峰高與內(nèi)標(biāo)峰高之比為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?！　?.4.3質(zhì)控樣品以配血漿標(biāo)準(zhǔn)樣品同樣方法，另行配制紫杉醇的質(zhì)控樣品，濃度分別為0.25，2.50，4.00mg.L-1。它們將作為“未知樣品”隨機分散于每批待測血樣和血漿標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行測定，以每次的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出質(zhì)控樣品測定濃度。以質(zhì)控樣品測定濃度與標(biāo)示濃度的比值計算方法的精密度、重現(xiàn)性和回收率?！　?、結(jié)果　　2.1色譜行為　　紫杉醇在227nm處顯示最大吸收。選用2

7、27nm作為檢測波長時，所用色譜條件下基線波動小，紫杉醇和內(nèi)標(biāo)峰形尖銳。空白血漿層析圖譜中對應(yīng)紫杉醇和內(nèi)標(biāo)的保留時間12.2min和9.7min處無峰出現(xiàn)，與各雜質(zhì)峰分離良好?！　?.2線性關(guān)系和靈敏度　　血漿中紫杉醇濃度在0.03～5.00mg.L-1范圍內(nèi)，r=0.9999(n=7。檢測器靈敏度為0.0005AUFS，以基線噪音3倍計算，最低檢測濃度為0.008mg.L-1?！　?.3精密度和重現(xiàn)性　　制作血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線，按血樣項下操作，測定質(zhì)控樣品濃度，考察批內(nèi)和批間變異。分試管制作同濃度樣品，測定批內(nèi)誤差，日內(nèi)變異性，結(jié)果見表1。一批同濃度樣

8、品系列分散在2周內(nèi)同上制作，測定批間誤差，日間變異性?！　?.4方法回收率　　高、中、低3個濃度的質(zhì)控樣品按未知樣本隨標(biāo)準(zhǔn)