飼料中添加硫胺素對(duì)建鯉魚(yú)肉、魚(yú)糜品質(zhì)及肌肉cystatincathepsins表達(dá)的影響

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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)Category：墨窆魚(yú)量：!!魚(yú)；S窆魚(yú)≥：2三±!；量里墨壘：!±2Number：$20104204SichuanAgriculturalUniversityMaster’SDegreeDissertationEffectofdietarythiamineontheconstructionofcarpmeat，surimiqualityandexpressionsofmuscleCystatin／CathepsinsChenxiuhua麓。j。r：AgriculturalProductProcessingandStorage‘●一●Engineeri

2、ngDirectedbyAssociateProfessorLiShuhongYa’all，625014，Sichuan，P．R．ChinaJune2014萬(wàn)方數(shù)據(jù)論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)所使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生簽名：釀焉笮矽雌年彭月7日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全

3、了解四川I農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川I農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。口本論文不保密。(請(qǐng)?jiān)谝陨峡趦?nèi)劃“√”)研究生簽名：際秀牟導(dǎo)師簽名口本論文保密，在一年解密后適用本授權(quán)。摻喇k砌午年f月7日卅降伽詹萬(wàn)方數(shù)據(jù)摘要本實(shí)驗(yàn)主要研究飼料中添加硫胺素(VBl)對(duì)幼建鯉肌纖維特性、魚(yú)肉品質(zhì)及魚(yú)糜凍藏品質(zhì)的影響。在此基礎(chǔ)上，初步探討具有抗氧化特性的硫胺素通過(guò)調(diào)節(jié)Cystatin

4、／Cathepsins表達(dá)影響?hù)~(yú)肉品質(zhì)形成的可能作用途徑，以及其影響?hù)~(yú)糜凍藏品質(zhì)的可能作用機(jī)制。1、硫胺素水平對(duì)建鯉肌纖維特性、魚(yú)肉品質(zhì)的影響實(shí)驗(yàn)選擇300尾健康建鯉幼魚(yú)(初重8．20士0．029)，平均分為兩組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50尾。缺乏組和正常組分別飼喂硫胺素水平為0．25mg／kg、1,06mg／kg的半純合飼料。60天后測(cè)定魚(yú)肉品質(zhì)，結(jié)果表明：飼喂正常水平硫胺素的建鯉幼魚(yú)與缺乏組相比，其新肌纖維募集能力強(qiáng)，肌纖維密度、肌原纖維耐折力及剪切力都極顯著提高(p<0．01)，肌纖維平均直徑、pH和失水率降低，肉質(zhì)明顯提高。2、硫胺素水平對(duì)建鯉魚(yú)糜凍藏品

5、質(zhì)的影響取兩組建鯉背肌，制成魚(yú)糜進(jìn)行凍藏實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：11漂洗后的魚(yú)糜(凍藏0周)，正常組CTSB和CTSL活性極顯著低于缺乏組(p

6、乏組差異不顯著(p>0．05)，但凍藏4、6周時(shí)，正常組分別顯著(O．Ol

7、oI雙酶切及連接反應(yīng)，構(gòu)建原核表達(dá)載體CTSB／L．pET．30a，并轉(zhuǎn)化至感受態(tài)E．coliDH50c，經(jīng)菌落PCR檢測(cè)、雙酶切和單酶切鑒定正確后，將該原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)入感受態(tài)E．coliBL21(DE3)。CTSB和CTSL均分別在lmmol／L的IPTG，37℃，3h及0．5mmol／L的iPTG，37℃，2h的最適誘導(dǎo)條件下，成功表達(dá)了包涵體形式的蛋白。通過(guò)菌體的超聲破碎，離心分離得到CTSB、CTSL蛋白，再經(jīng)尿素梯度洗滌及鎳親和層析純化得到蛋白CTSB、CTSL。用純化蛋白免疫BaIb／C小鼠制各抗體，CTSB、CTSL抗體效價(jià)分別達(dá)到1：256000

8、、1：512000。4．