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《《血清學(xué)診斷技術(shù)》PPT課件》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、雞病血清學(xué)檢驗(yàn)一原理許多病毒具有凝集動(dòng)物紅細(xì)胞的能力,這種凝集能力可被相應(yīng)的抗體所抑制,故可用已知病毒檢測(cè)相應(yīng)的血凝抑制抗體.也可以用已知標(biāo)準(zhǔn)抗體對(duì)分離的病毒進(jìn)行鑒定.紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)二使用范圍新城疫、禽流感、減蛋綜合征、雞毒支原體、滑液囊支原體等病原微生物感染后的抗體檢測(cè)；或相應(yīng)病原分離后的鑒定三器材1.血凝板、2.微量移液器3.標(biāo)準(zhǔn)抗原4.1%紅細(xì)胞懸浮液5.被檢血清6.稀釋液四操作程序（一）0.5％――１％紅細(xì)胞的準(zhǔn)備1.阿氏液(抗凝劑)的配制葡萄糖1.866ｇ檸檬酸鈉0.8ｇ檸檬酸0.055ｇ氯化鈉0.418g蒸餾水10
2、0ml混勻放入100ml葡萄糖瓶?jī)?nèi)，10磅115度10分鐘高壓滅菌。冷卻后4℃保存?zhèn)溆谩?.采血取健康雞翅靜脈或心臟采血，(按阿氏液2份，血液1份）注意:(1).兩只健康的雞血混合;(2).阿氏液的量要夠3.紅細(xì)胞懸液的配制：將血液注入離心管中，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5-10分鐘，用吸管吸去上清液和紅細(xì)胞上層的白細(xì)胞薄膜，將沉淀的細(xì)胞加稀釋液（生理鹽水）洗滌，再用離心機(jī)3000轉(zhuǎn)/分鐘離心5-10分鐘，充去上清液，再加稀釋液洗滌，如此反復(fù)洗滌三次，將最后一次離心后的紅細(xì)胞，按1%的稀釋度加入稀釋液（1毫升紅細(xì)胞泥加99毫升稀釋液
3、）。(二)．被檢血清將被檢雞群編號(hào)登記，用消毒過(guò)的干燥注射器采血，注入潔凈干燥試管內(nèi)（微量法可用孔經(jīng)2-3毫米塑料管由翅靜脈采血），在室溫中靜置或離心，待血清析出后使用。注意:每只雞應(yīng)更換一個(gè)注射器，嚴(yán)禁交叉使用。(三）血凝抗原效價(jià)測(cè)定（操作量25ul）(1)抗原一般以雞新城疫II系或Lasota系作為已知抗原。來(lái)源:1).購(gòu)買:目前也有用聚乙二醇使Lasota系病毒液濃縮，作成穩(wěn)定濃縮抗原，HA效價(jià)達(dá)1：5000以上，4℃半年不變。2)自制:A.用雞新城疫II系或者Lasota系疫苗接種雞胚制備抗原：B.疫苗用滅菌生理鹽水稀釋1
4、0倍，以0.1毫升接種于10日齡的雞胚尿囊內(nèi);C.凡接種后72-120小時(shí)內(nèi)死亡的雞胚，且病變顯著者，分別收獲雞胚尿囊液于消毒試管內(nèi)，如有血細(xì)胞應(yīng)離心（2000轉(zhuǎn)/分鐘）15分鐘，取上清液;D.作HA試驗(yàn)，其凝集價(jià)在1：640以上的雞胚雞，分裝于潔凈干燥的青霉素瓶中，保存于冰箱備用。2.抗原血凝價(jià)的測(cè)定每種抗原做兩排，結(jié)果取均值1).1-12孔加生理鹽水25ul2).第1孔加抗原25ul，反復(fù)吹打10次吸取25ul到第2孔，依此類推倍比稀釋至第11孔3).最后從第11孔吸取25ul棄去,第12孔做生理鹽水對(duì)照4).所有孔加25ul
5、1％紅細(xì)胞5).將血凝板振蕩1分鐘6新城疫病毒室溫（18℃—22℃）作用30分;禽流感病毒37℃作用30分.夏季結(jié)果出現(xiàn)快，冬季較慢新城疫病毒時(shí)間長(zhǎng)，溫度高易發(fā)生洗脫7結(jié)果判定1).完全凝集孔為終點(diǎn)2).將血凝板成45°角豎立觀察3).紅細(xì)胞呈淚滴狀沉淀為不凝集4).孔底沒(méi)有紅細(xì)胞沉淀,紅細(xì)胞均勻平鋪于孔底為凝集,此孔稀釋倍數(shù)為1個(gè)工作單位孔號(hào)12345678910稀釋倍數(shù)5102040801603206401280對(duì)照生理鹽水（毫升）病毒液（毫升）4*12525252525252525252525252525252525(25)
6、棄去生理鹽水（毫升）252525252525252525250.5%紅細(xì)胞液（毫升）25252525252525252525作用溫度與時(shí)間混合均勻置18~22℃作用45~60分鐘，對(duì)照管出現(xiàn)結(jié)果時(shí)判定結(jié)果（舉例）++++++++++++++++++++++++++++++--雞新城疫紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（HA試驗(yàn)）(過(guò)程圖)注意能使雞紅細(xì)胞完全凝集的病毒液的最高稀釋倍數(shù)，稱為該病毒液的紅細(xì)胞凝集效價(jià)。如上例，病毒病的HA效價(jià)為1：320。（四)紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)1.抗原準(zhǔn)備（工作濃度的準(zhǔn)備）紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（HI試驗(yàn)）時(shí)，病毒抗原液2
7、5ul內(nèi)需含4個(gè)凝集單位，所以，應(yīng)將原菌抗原毒作成320/4=80倍稀釋。2操作步驟(1)每孔加25ul的稀釋液:第1孔加25ul待檢血清，反復(fù)吸吹10次;吸取25ul于第2孔，以此類推倍比稀釋至第11孔;最后從第11孔取25ul棄去,第12孔為抗原對(duì)照;(3)每孔加4單位抗原;室溫下(18-22℃)作用30分(4)取1％紅細(xì)胞25ul加于各孔中(5)將血凝板振蕩1分鐘(6)室溫作用30-45分鐘（禽流感37℃）觀察結(jié)果(7)結(jié)果判定將血凝板呈45°豎起觀察完全抑制孔紅細(xì)胞呈淚滴樣下沉,此孔為抑制終點(diǎn).雞新城疫紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（
8、HＩ試驗(yàn)）(過(guò)程圖)孔號(hào)12345678910稀釋倍數(shù)１２３４５６７８９對(duì)照生理鹽水待檢血清２５２５2525252525252525252525252525252525(25)棄去4單位抗原252525252525252525250.5%紅細(xì)胞液（
