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1、南方農(nóng)業(yè)學(xué)報JournalofSouthernAgricultureISSN2095—1191；CODENNNXAABhttp：／／www．nfnyxb．cnDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2015．5．745轉(zhuǎn)基因煙草中外源基因?qū)崟r熒光定量PCR檢測方法的建立王盛，謝芝勛+，謝麗基，謝志勤，黃莉，羅思思，鄧顯文，黃嬌玲，劉加波(廣西獸醫(yī)研究所／廣西畜禽疫苗新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室．南寧530001)摘要：【目的】建立SYBRGreenI實(shí)時熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)基因煙草中外源基因拷貝數(shù)的方法，為轉(zhuǎn)基因植物中外源基因拷貝數(shù)的檢測提供參考。【方法】采
2、用SYBRGreenI實(shí)時熒光定量PCR方法，檢測轉(zhuǎn)基因煙草中外源綠色熒光蛋白基因(GFP)的拷貝數(shù)，以煙草單拷貝的內(nèi)源核糖核酸還原酶基因(RNR2)作為內(nèi)參基因，建立相對定量的雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法檢測轉(zhuǎn)基因煙草中外源基因拷貝數(shù)的方法?！窘Y(jié)果】構(gòu)建RNR2基因、餅P基因?qū)崟r熒光定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別為尸．0．2858x+5．6695和y----0．2826x+2．1048，R2分別為0．9994和0．9989，相關(guān)性較高。在檢測的5株轉(zhuǎn)基因煙草中Gj：隧因的拷貝數(shù)分別為5、8、19、28和45，非轉(zhuǎn)基因煙草植株的GFP基因拷貝數(shù)為0?！窘Y(jié)論】建立的轉(zhuǎn)基因煙草中外源基因
3、SYBRGreenI實(shí)時熒光定量PCR檢測方法具有簡單、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，可用于基因工程中對優(yōu)良轉(zhuǎn)化植株的篩選及外源基因表達(dá)量的快速檢測和定量分析。關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)基因煙草；雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法；外源基因；拷貝數(shù)；SYBRGreenI實(shí)時熒光定量PCR中圖分類號：Q786文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：2095—1191(2015)05—0745—05Detectionmethodofexogenousgeneintransgenictobaccobyreal-timefluorcquantitativePCRreal-timenuorescencequantitativeWANGSh
4、eng，XIEZhi-xun+，XIELi-ji，XIEZhi-qin，HUANGLi，LUOSi—si，DENGXian—wen，HUANGJiao-ling，LIUJia—bo(GuangxiVeterinaryResearchInstitute／GuangxiKeyLaboratoryofAnimalVaccinesandNewTechnology，Nannmg530001，China)Abstract：【Objective]TheSYBRGreenIreal-timequantitativePCRmethodfordetectingcopynumberof
5、exogenousgeneintransgenictobaccowasestablishtoprividereferencefordetectingcopynumberofexogenousgeneintransgenicplant．【Method]BySYBRGreenIreal—timefluorescencequantitativePCRtechnique，thecopynumberofgreen—fluores—centproteingene(GFP)asexogenousgeneintransgenictobaccowasdetected，takinge
6、ndogenousribonucleotidereductasegene(RNR2)oftobaccoasreferencegene．ThentwostandardCurvemethodofrelativequantificationwasestablishtode—tectcopynumberofexogenousgeneintransgenictobacco．【Resuh】ThestandardcurvesofGFPgeneandRNR2genewereconstructed．whichwerey：一0．2826x+2．1048andy=一0．2858x+5．
7、6695，respectively，andthecorrelationeoefficientswere0．9994and0．9989．Thecopynumbersofthefiveputativetransgenictobaccoswere5，8，19，28and45，respec—tively，andthatofnon—transgenictobaccowas0．【Conclusion】TheSYBRGreenIreal-timequantitativePCRmethodfordetectingcopynumberofexogenousgeneisrapid，c
8、onven
