冰凍切片免疫熒光染色步驟.doc

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1、冰凍切片免疫熒光染色步驟：（1）冰凍切片取出，室溫放置使其干燥后，用冷丙酮于4℃固定10分鐘。（2）切片用0.01MPBS清洗后加入1.2%雙氧水作用30分鐘，以除去非特異染色。（3）0.01MPBS清洗，3次×10分鐘。（4）0.3%TritonX-100作用30分鐘。（5）加入以抗體稀釋液（含1%BSA的0.01MPBS，pH7.4）稀釋至工作濃度的一抗，4℃過夜。（6）0.01MPBS清洗，3次×10分鐘。（7）加入熒光抗體TRITC-IgG（1：100）或FITC-IgG（1：100），室溫孵育2小時。（8）0.01MPBS清洗，3次×10分鐘。（9）緩沖甘油封片

2、，熒光顯微鏡下觀察。對照組：采用空白對照：除用0.01MKPBS代替一抗外，其余程序與實(shí)驗(yàn)組相同。載玻片處理步驟：（1）硫酸浸泡過夜。（2）自來水沖洗干凈后雙蒸水沖洗3遍。（3）晾干后在0.1%明膠中快速浸泡后取出。室溫晾干或37℃烤干備用。