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1、大黃素的制備【實訓目的】1.能夠運用溶劑提取法,pH梯度分離法對大黃中的大黃素進行提取和精制。2.會用顯色反應、色譜法進行大黃素的檢識?！緦嵱栐怼勘緦嶒炇且砸掖紴槿軇么簏S素、大黃酚等酸性不同用pH梯度分離法進行提取分離?！緦嵱柌牧稀吭O備：圓底燒瓶、冷凝管、研缽、索氏提取器、分液漏斗、水浴鍋、硅膠CMC-Na薄層板、纖維素粉（柱色譜）、新華色譜濾紙（中速、20cmX7cm）、托盤天平、展開缸（筒）、試管、試管架藥品：大黃粗粉、20%硫酸、氯仿、pH8緩沖溶液、pH9.9緩沖溶液、鹽酸、冰醋酸、毗噪、5%氫氧化鈉溶液、5%碳酸鈉溶液、2%氫氧化鈉、石油醋（沸程60?90°C）、苯■乙酸乙
2、酯（8：2）、氨、甲苯、0.5%醋酸鎂試液、1%大黃酸標準品氯仿溶液、1%大黃素標準品氯仿溶液、1%蘆薈大黃素標準品氯仿溶液【操作步驟】1.游離蔥釀的提取稱取大黃粗粉50g,置于200ml圓底燒瓶中，加％20硫酸水溶液100ml,在水浴屮加熱回流4?6小時，稍放冷，過濾，濾渣用水洗至近屮性后，于70°C左右干燥。2.大黃酸的分離向氯仿提取液中一次性地加入pH8的緩沖液70ml,振搖萃取，靜置，充分分層后，分取緩沖液于燒杯中，保留氯仿溶液。緩沖液用鹽酸調至pH3,析出黃色大黃酸沉淀，靜置，過濾，沉淀用蒸憎水洗至近中性，低溫干燥，再用冰醋酸重結晶，得大黃酸黃色針晶。3.大黃素的分離分離大黃酸后的
3、氯仿溶液，再一次性地加入pH9.9的緩沖液100ml,振搖萃取，靜置，充分分層后，分取緩沖液于燒杯中，保留氯仿溶液。緩沖液用鹽酸調至pH3,析出大黃素沉淀，靜置，過濾，沉淀用蒸憾水洗至近中性，低溫干燥，再用毗噪重結晶，得大黃素橙色結晶。1.蘆薈大黃素的分離分離大黃素后的氯仿溶液，再一次性地加入5%碳酸鈉溶液-5%M氧化鈉溶液（9:1）的堿性溶液200ml,振搖萃取，靜置，充分分層后，分取堿性溶液于燒杯中，保留氯仿溶液。堿液用鹽酸調至pH3,析岀蘆薈大黃素沉淀，靜置，過濾,沉淀用蒸憾水洗至近中性，低溫干燥，再用乙酸乙酯重結晶，得蘆薈大黃素橙色結晶。2.大黃酚和大黃素甲醯的分離分離蘆薈大黃素的氯
4、仿液，再以2%氫氧化鈉溶液振搖萃取至堿水層近無色為止（3?4次），合并氫氧化鈉萃取液于燒杯中，用鹽酸調至pH3,析出沉淀,靜置，過濾，沉淀用蒸憾水洗至近中性，低溫干燥，取干燥后的沉淀溶于小體積石油醸中，作為柱色譜的樣品溶液。裝柱：去纖維素粉約8g,加入已裝有水飽和石油醍（60?90°C）的色譜柱屮，待纖維素粉完全沉降后，打開色譜柱下端活塞，將色譜柱內液體放至與柱床面平齊，關閉活塞。樣品上柱：將樣品溶液用移液管小心加于色譜柱柱床頂端。洗脫：用水飽和石油醸（60?90°C）洗脫，分段收集，每份10ml,分別濃縮，經(jīng)紙色譜檢查，相同組分合并，分別得到大黃酚和大黃素甲瞇。3.鑒定（1）化學檢識取大黃
5、素少許，用乙醴溶解，做如下反應：堿液試驗：取試樣1ml,加20%氫氧化鈉溶液數(shù)滴，觀察顏色。醋酸鎂反應：取試樣1ml,加醋酸鎂試樣數(shù)滴，觀察現(xiàn)象。（2）薄層檢識吸附劑：硅膠CMC-Na薄層板樣品：各蔥醍成分的1%氯仿溶液對照品：①1%大黃酸標準品氯仿溶液；②1%大黃素標準品氯仿溶液；③1%蘆薈大黃素標準品氯仿溶液展開劑：①苯■已酸乙酯(8：2)；②苯■甲醇(8:1)顯色劑：①氨氣熏蒸后觀察；②5%氫氧化鉀噴霧(3)紙色譜檢識支持劑：新華色譜濾紙(中速、20cmX7cm)樣品：各蔥醍成分的1%氯仿溶液對照品：①1%大黃酸標準品氯仿溶液；②1%大黃素標準品氯仿溶液；③1%蘆薈大黃素標準品氯仿溶液
6、展開劑：甲苯顯色劑：0.5%醋酸鎂甲醇溶液【實訓說明】1.pH8的緩沖液為磷酸氫二鈉■檸檬酸緩沖液。配制方法：取0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液194.5ml與0.1mol/L檸檬酸溶液5.5ml混合，即得。PH9.9的緩沖液為碳酸鈉■碳酸氫鈉緩沖液。配制方法：取0.1mol/L碳酸鈉溶液50ml與0」mol/L碳酸氫鈉溶液50ml混合，即得。2.各緩沖液進行萃取時，采用一次性加入的方法，實驗證明，如將緩沖液分次蘋取，分離效果不理想?！緦嵱査伎肌扛鶕?jù)結構分析，說明大黃素為什么能用pH梯度法分離？
